专一性脱硫微生物(Gordona nitida LSSEJ-1)的分离鉴定和dszB基因的克隆及其发酵条件的优化

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采用模式含硫有机物二苯并噻吩(DBT)为唯一硫源的选择性培养基,从大港油田和胜利油田的含油土样中分离筛选到42株脱硫微生物菌株。经过纯化培养,高压液相色谱分析确定,其中一株细菌LSSEJ-1能将DBT分解为羟基联苯(HBP),证明该菌是具有“4S途径”脱除有机硫的细菌。采用16S rRNA的鉴定方法,得到长约1.5kb的PCR扩增产物,对此片段进行了序列测定。用BLAST程序对该菌的16S rDNA(16S rRNA基因)序列和网上Genbank中已知微生物的16S rDNA序列进行核苷酸同源性比较。结果表明该菌与戈登氏菌属(Gordona)的16S rDNA的核苷酸序列同源性高达99%。因此,将该菌定为戈登氏菌属(Gordona)。显微镜和电子显微镜的观察结果证明,该菌为短杆状细菌。采用PCR扩增方法,克隆了该菌的脱硫B基因(dszB)。通过驯化培养和以脱硫率为主要指标的条件优化研究表明,其脱硫能力接近50%;最佳的培养基配方为(每升):KH2PO4 2.44g、Na2HPO 12H2O 12.03g、MgCl6H2O 0.4g、NH4NO3 2g、MnCl2·4H2O 4mg、FeCl6H2O 1mg、CaCl2 0.75mg、DBT 20mg、葡萄糖3g;最适合的培养条件为:初始pH值为pH8-9,装液量100ml/500ml三角瓶,接种量1%,培养温度30℃,菌龄3天。
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