人参皂甙Rh2对人肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响

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人参(Panax ginseng)为五加科多年生草本植物,含有多种生物活性物质,有防治肿瘤、延缓衰老、抗辐射等多种生物学活性作用,而人参皂苷是人参主要活性成分之一。人参皂苷G-Rh2是人参皂甙的一种,通过大量的实验证实,它具有阻滞肿瘤细胞细胞周期,诱导肿瘤细胞凋亡、诱导肿瘤细胞分化降低恶性程度;还可抑制肿瘤的转移;增强机体的免疫能力,控制肿瘤生长;还可与其他抗癌药物协同,增强抗癌药的药效。G-Rh2的抗肿瘤作用活性较强且较为广泛,对于不同肿瘤细胞产生作用亦不尽相同,具有多个靶点、多个环节、多种效应相互影响,复杂关联的特点,并且不易产生耐药性,对正常细胞毒性低,是以成为近年来研究的热点。NF-KB信号途径、Fas/FasL系统途径、caspase家族等蛋白因子在G-Rh2对于A549的凋亡中所起的作用已经得到大家共识,但是作为诱导细胞凋亡的经典途径中的Bcl-2家族,和MAPK家族的ERK途径在G-Rh2作用于A549中的影响,在国内外的报道还比较少。本实验以人源肺腺癌细胞(A549)为研究对象,应用MTT法检测不同浓度/不同时间G-Rh2处理A549后细胞增殖情况,再应用流式细胞技术(FCM)检测细胞周期的变化情况,最后从蛋白水平应用Westen blotting方法检验特定蛋白表达水平的变化,探讨其发挥抗肿瘤效应的关键蛋白及分子信号传导通路。希望通过研究能进一步明确G-Rh2的抗肿瘤机理,促进G-Rh2抗肿瘤药物的进一步开发和更广泛的临床应用。得到如下结果:1、G-Rh2对于A549有明显抑制增殖作用,且呈浓度、时间依赖性。48.18μimol/mL为半数抑制浓度(ICso)。2、G-Rh2处理A549细胞后,流式细胞仪检测发现其G1期细胞比率增加,S期细胞比率下降,凋亡细胞比率增加(p<0.05),呈浓度、时间依赖性。3、Western boltting法检测Bcl-2系列及ERK系列蛋白的表达变化,以β-actin为内参对照。Bcl-2的表达减弱,Bax的表达增强:Bid及Cyto-c的表达增加。P-ERK、ERK的表达下降结果提示:1、G-Rh2通过引发A549细胞G1期细胞周期阻滞,抑制细胞增殖。2、G-Rh2通过下调Bcl-2的表达,上调Bax的表达。上调Bid的表达,增加Cyto-c的释放诱导A549细胞凋亡。3、G-Rh2可能是通过下调P-ERK及ERK的表达抑制A549细胞增殖。
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