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目的:结直肠癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,是世界上导致癌症相关性死亡的第三及第四大恶性肿瘤。在我国经济水平飞速发展的情况下,人们的生活水平得到了不断的提高,以往的饮食习惯也发生了变化,因此结直肠癌的发病率和死亡率在中国逐年增加。据统计,目前发现确诊时即伴有远处转移的结直肠癌患者约占25%。除了肝转移,腹膜种植转移是结直肠癌最常见的转移部位。发生腹膜转移的结直肠癌患者,中位生存期据统计仅仅只有5-9个月,预后极差。因此重视腹膜转移的发生,通过对腹膜转移过程中肿瘤细胞与间皮细胞形成的肿瘤微环境进行研究,找到结直肠腹膜转移的发生机制及相关炎性介质具有重要意义,在结直肠癌腹膜转移的治疗中可能有一定应用价值,这不仅能有利于病人生存期的延长,而且有助于改善患者的生活质量。研究方法:1、收集结直肠癌细胞RKO分泌的上清,经处理后加入人腹膜间皮细胞系HMrSV5共培养作为实验组;无血清培养基与人腹膜间皮细胞HMrSV5共培养作为对照组(1)应用倒置显微镜观察间皮细胞形态结构及细胞之间连接的改变(2)应用CCK-8实验检测间皮细胞的增殖改变(2)流式细胞仪判断间皮细胞凋亡比例(3)免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达情况2、腹膜间皮细胞HMrSV5与结直肠癌细胞RKO通过Transwell小室共培养,观察受损腹膜间皮细胞是否对结直肠癌细胞具有趋化作用。结果:1、接触结直肠癌上清后腹膜间皮细胞的细胞连接被打开,细胞大量脱落,出现裸区,形态发生改变,变为圆形、柱形。2、结直肠癌上清抑制腹膜间皮细胞的增殖使用无血清培养基与结直肠癌上清分别加入腹膜间皮细胞,应用CCK-8检测细胞的增殖能力,与无血清培养基相比,加入结直肠癌上清的腹膜间皮细胞增殖能力明显受到抑制。3、结直肠癌细胞上清诱导腹膜间皮细胞发生凋亡应用Annexin V-FITC检测细胞凋亡情况,结果发现结直肠癌细胞上清促进腹膜间皮细胞的凋亡;应用免疫印迹法检测人腹膜间皮细胞HMrSV5关于抗凋亡蛋白Bcl-2与促凋亡蛋白Bax的表达,结果发现结直肠癌细胞上清能够显著抑制间皮细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并且上调了促凋亡蛋白Bax的表达。4、共培养的受损间皮细胞可以反用于结直肠癌细胞,使其迁移能力提高应用Transwll小室共培养结直肠癌细胞与间皮细胞,单独培养结直肠癌细胞作为对照,结果与间皮细胞共培养后,结直肠癌细胞迁移能力明显提高。结论:1、结直肠癌细胞RKO分泌的细胞上清能够抑制间皮细胞正常生长增殖,同时还能够诱导间皮细胞发生凋亡。2、受损伤刺激后的间皮细胞可以反作用于结直肠癌细胞,促进其迁移。