大约30%左右的癫痫患者对抗癫痫药(antiepileptic drugs, AEDs)不敏感,出现难以被控制的反复发作,称之为药物难治性癫痫。多药转运体P-糖蛋白(P-glycoprotein, PGP)介导的难治性癫痫耐药已被国内外公认。因其能识别多种不同作用机制的AEDs,主动将药物泵出血脑屏障,引起脑内药物浓度下降,从而导致耐药。但PGP表达上调的分子机制目前尚未清楚。p38蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase, p38MAPK)是MAPK家族的最新成员,主要通过激活一些转录因子和其它的蛋白酶而产生一定的生物学效应。目前认为,p38MAPK信号通路主要参与应激条件下细胞的免疫调节、炎症反应、缺血／再灌注损伤和细胞凋亡过程。文献证实有许多的因素可以诱导多药转运体PGP表达,如细胞毒性药物、放射线照射、热休克等应激变化。而这些因素恰恰也是激活p38MAPK信号转导途径的诱因。同时体外试验发现MAPKs信号转导通路参与了肿瘤细胞的多药耐药。以上提示p38MAPK可能参与了PGP介导的难治性癫痫的耐药。本课题采用免疫组化、Western-Blot、微透析、高效液相色谱技术等,在不同标本上(整体动物,动物脑组织),研究p38MAPK途径对PGP表达及难治性癫痫耐药的影响。本课题主要包括两个部分：第一部分：p38蛋白激酶对大鼠脑内P-糖蛋白表达和行为学的影响建立慢性戊四氮点燃癫痫动物模型,采用免疫荧光和Western-Blot的方法,在癫痫模型上观察p38MAPK拮抗剂对脑内PGP表达及大鼠行为学的影响。第二部分：p38蛋白激酶对癫痫大鼠海马细胞外液抗癫痫药物浓度的影响建立慢性戊四氮点燃癫痫动物模型,采用微透析技术和高效液相色谱技术,通过腹腔注射VPA和LTG,观察在癫痫和正常大鼠海马细胞外液AEDs的浓度差异；观察海马局部给予p38MAPK拮抗剂SB202190后,癫痫大鼠海马细胞外液中AEDs的浓度变化。实验结果第一部分：癫痫组大鼠脑内p38MAPK和PGP的表达显著高于对照组(p<0.01)；给予p38MAPK拮抗剂SB202190后,癫痫大鼠脑内p38MAPK和PGP的表达明显下降(p<0.05),癫痫发作级别及次数明显下降(p<0.05)。第二部分：(1)癫痫组与正常组比较,给药后30-120min VPA浓度均降低(p<0.05),而给药后150min二者无明显差异(p<0.05)；SB202190组与癫痫组比较,给药后30-120min VPA浓度均升高(p<0.05),而给药后150min二者无明显差异(p>0.05)。(2)癫痫组与正常组比较,给药后30-90min及150min LTG浓度降低(p<0.05),而120min二者无明显差异(p>0.05)；SB202190组与癫痫组比较,给药后各时间点LTG浓度均升高(p<0.05)。(3)癫痫组与SB202190组VPA峰浓度出现时间一致,均为60min,较正常组(30min)后移；(4)癫痫组与SB202190组LTG峰浓度出现时间一致,均为90min,较正常组(60min)后移。综上所述,通过本实验研究得出以下结论：1. p38MAPK拮抗剂SB202190可以减少癫痫大鼠脑内的PGP表达,表明p38MAPK信号转导途径参与了PGP的表达；阻断p38MAPK信号通路可以降低大鼠点燃后的发作分级。2. p38MAPK拮抗剂SB202190可以提高癫痫大鼠海马细胞外液中VPA和LTG的药物浓度。3. p38MAPK可能通过上调PGP参与了难治性癫痫的耐药。