目的筛查有/无微血管侵犯(microvascular invasion,MVI)的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)(以下简称肝癌)相关外泌体中差异表达的关键miRNA分子,并分析其相关靶基因功能,以阐明肝癌复发、转移可能潜在的分子调控机制。方法1.收取我院肝胆外科可切除肝细胞癌患者血液并制成血清,病理科严格按照《2015原发性肝癌规范化病理诊断指南》采用“7点”基线方法取材,确诊的肝细胞癌病例按照“大体标本描述重点”及“显微镜下描述重点”行MVI标准诊断,其中3例MVI(+)和3例MVI(-)共6例肝癌患者血清标本按照有无MVI进行分组;2.采用Western blot法及蛋白显示条带的灰度值分析外泌体(exosomes)蛋白的表达水平;通过透射电子显微镜观察血清外泌体形态;粒径分析仪分析外泌体直径浓度分布;提取外泌体内总RNA,通过对miRNA测序,筛查两组之间差异显著的miRNA DEGs,应用三种生物信息学软件(Mi Randa、miRBase、Target Scan)对差异表达miRNA的靶基因进行预测,并数据库miRCancer检索功能分析及文献检索验证,最后采用GO和KEGG对靶基因进行生物信息学分析。结果1.Western blot结果显示:两组均表达外泌体表面标志分子CD63、TSG101,其中MVI(+)组外泌体表达高于MVI(-)组(P<0.05);利用透射电子显微镜观察外泌体形态,结果显示.:粒径分析平均直径在71.63-87.06nm符合外泌体直径在30-150nm之间。2.外泌体中miR-194-5p、miR-3960、miR-192-5p、miR-183-5p、miR-483-3p、miR-122-5p、miR-122-3p、miR-4788、miR-483-5p在 MVI(+)高表达(P<0.05),而外泌体miR-203a-3p低表达。经数据库miRCancer检索功能分析及文献检索验证,miR-483-3p、miR-483-5p表达上调。GO功能分析结果表明其靶基因的功能富集在细胞分泌的调控、肌动蛋白的调节、细胞迁移及激酶代谢调控等方面。KEGG通路分析结果显示miR-483-3p主要参与白细胞跨内皮迁移、肌糖醇磷酸代谢、炎症介质对TRP通道的调节等途径。miR-483-5p主要参与糖磷脂生物合成-神经节系列、甘氨酸-丝氨酸和苏氨酸代谢、内吞作用等途径。结论1.肝癌微血管侵犯组患者血清外泌体中关键差异miRNA分子miR-483-3p,miR-483-5p表达上调。2.miR-483-3p,miR-483-5p表达与数据库miRCancer检索功能分析及文献检索验证一致,功能分析显示两者在细胞分泌调控、肌动蛋白调节、细胞骨架重塑、细胞迁移、激酶代谢调控有重要作用,这些调控功能与肝癌细胞的高侵袭、转移密切相关。可能是微血管侵犯组肝癌患者预后差、复发早的重要调控分子,为未来肝癌复发转移防治提供了新思路和潜在靶点。