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目的： 研究miR-322在心肌细胞缺氧-复氧损伤中的作用及机制，本实验以干细胞定向分化为心肌细胞，通过心肌细胞缺氧-复氧实验模拟心肌梗死环境中发生的心肌缺血再灌注，希望通过此研究，为心肌损伤临床防治提供新思路。 方法： 1、小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）与胚胎干细胞（mESC-D3）培养。 2、慢病毒制备与转染。构建携带目的基因的慢病毒，miR-322过表达、miR-322敲减、Celf1过表达、Celf1敲减、miR-322与Celf1同时过表达，构建后转入mESC-D3细胞中，并筛选表达目的基因的细胞。 3、mESC-D3细胞定向分化为心肌细胞。将胚胎干细胞分为8组：未缺氧复氧组（Normal）；野生细胞缺氧复氧组（Wild）；空病毒细胞缺氧复氧组（Empty）；miR-322上调细胞缺氧复氧组（322-up）；miR-322下调细胞缺氧复氧组（322-down）；Celf1上调细胞缺氧复氧组（Celf1-LV）；Celf1下调细胞缺氧复氧组（Celf1-RNAi）；miR-322和Celf1同时上调缺氧复氧组（322-up+Celf1-LV）。经由悬滴培养方法制成拟胚体，4.5d后收集拟胚体在6cm培养皿中。 4、细胞缺氧复氧。分化建模成功，心肌细胞成熟时（选择分化后第8天）进行缺氧复氧处理。缺氧：5％C02、95%N23h，复氧：5％C02、95%O22h。 5、检测指标。观察各组细胞缺复氧后状态；荧光显微镜检测各处理组心肌细胞自发搏动频率变化；通过MTT比色法检测缺复氧前后细胞存活率；检测细胞培养液中乳酸脱氢酶活性和细胞内ATP含量变化；实时定量RT?PCR,以GAPDH作为标准对照，测定各组细胞相关心肌细胞基因（OCT-4，Nkx-2.5，α-MHC，MLC-2V，Sox-2）的变化；Western blot检测各组细胞蛋白（Nkx-2.5、cTnT）的表达水平。 6、统计分析。统计数据分析应用t检验评估两组差异性，P<0.05。 结果： 1、mESC-D3细胞成功诱导分化为可以产生自发搏动的心肌细胞； 2、miR-322上调、Celf1下调对干细胞分化的心肌细胞H/R损伤具有保护作用。Wild组心肌细胞搏动频率及存活率较Normal组明显降低，细胞内ATP含量降低，细胞培养液LDH活性升高，表明H/R造模成功。与对照组比较，322-up组、Celf1-RNAi组心肌细胞存活率、搏动频率增加，细胞内ATP含量升高，细胞培养液LDH活性降低，PCR结果表明多能性相关性基因（OCT-4、Sox-2）及心肌细胞基因（Nkx-2.5、MLC-2V、α-MHC）均上调，WB结果表明心肌细胞蛋白Nkx-2.5、cTnT均上调。 3、miR-322通过抑制Celf1表达来达到对干细胞分化的心肌细胞H/R损伤的保护作用。与对照组比较，322-up+Celf1-LV组心肌细胞存活率、搏动频率增加，细胞内ATP含量升高，细胞培养液LDH活性降低，但各指标变化均不如322-up组明显。PCR结果表明OCT-4、Sox-2、Nkx-2.5、MLC-2V、α-MHC基因均上调，WB结果表明心肌细胞蛋白Nkx-2.5、cTnT均上调，miR-322通过调控Celf1表达，调控下游基因表达，进而调控蛋白表达，从而发挥保护心肌细胞的作用，但miR-322上调没有完全抑制Celf上调产生的调节作用，说明miR-322和Celf1中间还有复杂的机制、中间分子有待研究。 结论： 1、miR-322上调对缺氧复氧心肌损伤有保护作用； 2、Celf1下调对缺氧复氧心肌损伤有保护作用； 3、miR-322通过抑制Celf1表达来达到对缺氧复氧心肌损伤的保护作用。