山楂叶是山楂属植物的叶片,作为传统中药材具有悠久的药用历史,其药用价值在于具有抗氧化、抗衰老、抗癌、抑菌、消炎、降血糖血压、预防心血管疾病等功效。山楂叶中的丰富活性物质,如黄酮类化合物及多糖,均是其主要的药理成分,因此,提取山楂叶中的活性成分,能够实现山楂叶的高值化利用,提高其利用价值。研究山楂叶有效成分的提取、纯化工艺,对于开发新型保健食品、药品及化妆品、提高农民收入具有重要的社会意义和现实意义。本文以干燥山楂叶为原料,研究了山楂叶成分的提取、纯化及分离技术,其主要研究结果如下:1.山楂叶最佳采收期前期确定,通过比较不同采收期山楂叶中的黄酮、多糖、蛋白质及水浸出物的含量变化,确定山楂叶的最佳采收期为11月初。2.通过单因素实验及正交实验确定直接水提法提取山楂叶黄酮的最佳提取工艺条件:料液比1:35,浸提时间60 min,浸提温度60℃,溶液pH3.6,提取次数3次,在此条件下,黄酮的提取率为69.17±0.59%。3.以水为介质,采用微波-超声波联合辅助提取法提取山楂叶黄酮,在单因素实验及PB实验的基础上,以黄酮提取率为响应值,利用BBD响应面实验确定最佳提取条件:微波时间63 s,微波功率264 w,料液比1:32,超声功率540 w,实际测得的黄酮提取率为90.68±0.53%。4.利用超声波辅助双水相法提取山楂叶黄酮和多糖,以山楂叶黄酮和多糖的提取得率及分配系数为指标,通过单因素实验筛选出PEG/(NH4)2SO4双水相体系作为提取溶剂,再结合BBD响应面实验,确定超声波辅助双水相法提取的最佳工艺条件:在PEG质量分数11.5%,(NH4)2SO4质量分数14%条件下,超声处理的条件为料液比1:37,超声时间35 min,超声功率360 w,超声温度67℃,在此条件下,黄酮提取得率为2.869%,多糖的提取得率为3.005%。5.通过比较七种不同大孔树脂对山楂叶黄酮粗提取液的吸附及解吸效果的影响,筛选出D101大孔树脂作为山楂叶黄酮纯化的最佳树脂。利用D101树脂的静态及动态吸附解吸实验,确定D101树脂纯化山楂叶黄酮的最佳工艺条件:样液pH5.0,上样液流速1.0 mL/min,上样液体积70 mL,40%乙醇为洗脱剂,洗脱流速1.0 mL/min,洗脱剂用量100 mL,纯化样品经冷冻干燥后测其纯度为42.4%,较未纯化前纯度提高2.8倍。6.利用Sephadex LH-20凝胶柱对D101树脂纯化后的山楂叶黄酮进行分离、纯化。采用水、20%、40%、60%及无水乙醇进行梯度洗脱,洗脱流速为0.5 mL/min,结果从水洗部分及40%的乙醇部分分离得到一种混合物和单一组分(组分3),其纯度分别为83.27%、94.27%。通过测定黄酮的还原力及对羟基自由基的清除能力,结果显示纯化后黄酮的还原力及羟基自由基清除能力明显提高,表明大孔树脂纯化法和葡聚糖凝胶柱层析法对黄酮的纯化分离有重要的意义。采用液质联用技术定性检测该分离组分3,经分析该物质可能为牡荆素-2″-O-鼠李糖苷。