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目的:糖尿病时,肾素血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)活性升高,血管紧张素Ⅱ(angiotensin,ANG,II)通过血管紧张素Ⅱ受体1 (angiotensin II type 1 receptor, AT1R)强烈的刺激血管内辅酶Ⅱ(nicotina- mide adenine dinucleotide phosphate)氧化生成活性氧(reactive oxygen species,ROS),如超氧化阴离子O2-,可导致一氧化氮(Nitric Oxide, NO)生物活性下降和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase)的含量降低,并使失活的NO形成有毒的过氧亚硝基阴离子,使c-jun氨基末端激酶(c-jun N terminal kinase, JNK)信号通路活性升高,氧化刺激血管紧张素原(Angiotensinogen, AGT)在肾小球系膜细胞和近曲小管表达增多,引起肾脏损害。糖尿病时,刺激caspase-3活性升高,促使肾小球足细胞,系膜细胞,肾小管上皮细胞和小管间质细胞凋亡增多。血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂(angiotensin II type 1 receptor blocker inhibits,ARBs)可选择性作用于AT受体1亚型,通过阻断RAS系统和ROS生成的恶性循环,可降低尿蛋白量,从而保护肾脏的功能;还可通过上调组织对胰岛素的敏感性,减轻胰岛素抵抗,减少糖基化终末产物(Advanced glycation end products, AGEs)的形成和集聚,降低尿中AGEs含量;同时还能降低糖尿病的预期发病率。本实验旨在探讨缬沙坦对糖尿病肾组织中JNK信号通路和凋亡关键因子caspase-3介导细胞凋亡的影响,了解对早期糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)产生保护作用的可能机制,为临床应用提供理论支持。方法:糖尿病模型的建立及分组:清洁级Wistar大鼠体重(120±5)g适应性喂养一周,随机分为3组①糖尿病组(DM组)(n=17)STZ按60mg/kg剂量,一次性腹腔注射,72小时后测血糖>16.7mmol/L即造模成功。模型成功后即给予等量蒸馏水灌胃。②缬沙坦组(Val组)(n=17)建模同上。造模成功后给予缬沙坦10mg/kg·d溶于等量蒸馏水中灌胃。③正常对照组(NC组)(n=10)给予同等剂量的枸橼酸钠腹腔注射,同期给予等量蒸馏水灌胃。实验期间各组大鼠均自由饮水和进食。收集血,尿标本,大鼠于灌胃后分别与4和8周时每组各处死半数。称重,乙醚麻醉,剖开腹腔,下腔静脉取血,摘取双肾并去被膜,吸水纸擦拭并称重;肾组织作免疫组化(SP法)检测肾组织中JNK,p-jnk,casapse-3的分布与表达,并进行病理图像分析,计算阳性目标表达指数;送流式检测细胞凋亡率;并行Western blotting检测MKK7、JNK、p-jnk和casapse-3;同时测定血生化指标:血糖,甘油三酯,总胆固醇,肌酐,尿素氮,尿酸,血白蛋白,低密度脂蛋白,高密度脂蛋白;测24小时尿蛋白量。所有数据应用SPSS13.0软件作统计学分析。结果1免疫组化结果显示:①JNK,p-jnk,casapse-3:4周时DM组和Val组阳性面积无显著性差异(P>0.05),但均较NC组高,(P<0.05);8周时Val组较DM组降低(P<0.05),DM组和Val组阳性面积较NC组明显升高(P<0.05)。2 Western bloting:4周时,三组间MKK7 caspase-3、JNK、p-jnk表达均无明显差别(P>0.05);第8周时,Val组和NC组JNK表达无显著性差异(P>0.05),但低于DM组(P<0.05),Val组MKK7、p-jnk、caspase-3表达高于NC组(P<0.05),但低于DM组(P<0.05)。3流式细胞学:4周时DM组大鼠肾组织细胞凋亡率较NC组增加(P<0.05),与Val组相比较无统计学意义(P>0.05)。Val组与NC组比较无显著性差别。8周时DM组大鼠肾组织细胞凋亡率较NC组增加更明显(P<0.05),Val组与DM组相比较凋亡率降低且有统计学意义(P<0.05)。Val组较NC组凋亡率升高,有统计学意义。4 MKK7、JNK、p-jnk、caspase-3与凋亡率的Pearson相关性分析:MKK7、JNK、p-jnk、caspase-3与凋亡率的相关系数分别为r=0.908、0.838、0.870、0.935,P<0.05。5 24小时尿蛋白量,4周时各组间无显著性差异(P>0.05);8周时,DM组和Val组均高于正常组(P<0.05),且DM组高于Val组(P<0.05)。6肾重/体重比:4周时,DM组和Val组间无差异(P>0.05),显著高于正常组比值(P<0.01);8周时,DM组和Val组间无差异(P>0.05),显著高于正常组比值(p<0.01)。体重:8周NC组体重较其余各组大且有显著性差异(P<0.05)。DM组和Val组各组间无显著性差异(P>0.05)。7血糖水平:4周时,较NC组,DM组与Val组血糖水平明显升高(P<0.01),8周时,DM组和Val组较NC组高且有显著差异(P<0.01),Val组较DM组血糖均数稍低但组间无统计学差异(P>0.05)。8各组间TG、CHO、LDL-C、HDL-C、BUN、Scr、UA、ALB比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:在早期糖尿病大鼠,高血糖引起各种细胞应激致JNK通路活性升高,发生信号通路级联反应,MKK7、JNK、p-jnk及凋亡关键因子caspase-3表达增多。缬沙坦治疗可能通过下调JNK通路活性,caspase-3表达下降,细胞凋亡率下降,尿蛋白量降低,有益于肾脏的保护。