目的：1.探讨蛋白激酶C（PKC）对原代培养神经元诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和核转录因子κB（NF-κB）表达的影响。2.探讨PKC和NF-κB对原代培养神经元的损伤作用。　　方法：1.皮层神经元的原代培养与鉴定：取新生24h内SD(Sprague-Dawley,SD)大鼠的大脑皮层，用低浓度的胰酶消化结合机械吹打获取单细胞悬液，再用0.4％的台盼蓝染色观察细胞存活率后种板。细胞培养至第10~14天，将培养在玻片上的细胞行甲苯胺蓝染色，光镜下观察培养细胞中的尼氏体来检验培养细胞中神经元的纯度。2.细胞培养至第10天，先用NF-?B的阻断剂甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮（TPCK）预处理1h后，再加入PKC特异性刺激剂佛波醇酯（PMA）作用于细胞，或先用PKC阻断剂Rottlerin预处理20min后再加入PMA刺激细胞，或直接加入PMA刺激细胞。细胞处理不同时间后，取细胞培养上清，行iNOS含量检测来观察PKC对iNOS表达的影响，检测LDH释放量来观察NF-κB对细胞的损伤程度；取不同处理的培养细胞，行半定量RT-PCR法检测NF-κBp65 mRNA表达，免疫细胞化学法检测PKC对iNOS表达的影响，流式细胞术AnnexinV/PI法检测细胞早期凋亡率，琼脂糖凝胶电泳检测PKC对培养神经元的损伤作用。　　结果:1.皮层神经元的原代培养与鉴定：通过低浓度的胰酶消化结合机械吹打制备的单细胞悬液，细胞的存活率达97％。在体外培养条件下神经元结构特征明显化，并能形成典型的神经细胞网络，神经元纯度达90%以上。2.半定量RT-PCR检测显示正常对照组NF-κBp65 mRNA有少量表达，PMA刺激组NF-κBp65 mRNA的表达显著增加，但PMA的作用可被Rottlerin和TPCK所阻滞。3.NF-κB对神经元早期凋亡率的影响：正常对照组细胞早期凋亡率为4.66％±1.20%；PMA刺激6h组，细胞早期凋亡率为17.70％±2.20%；TPCK预处理1h后再加入PMA刺激6h组，细胞早期凋亡率下降至8.78％±1.54%。PMA刺激组与其它两组比较差异显著（P＜0.05）。4.琼脂糖凝胶电泳检测结果显示：PMA刺激组细胞出现明显凋亡细胞特征性的DNA梯形条带；用Rottlerin预处理后，DNA梯形条带明显减弱。5.神经元LDH释放量测定：正常对照组LDH活性为146±41.40 U·L-1，PMA刺激组LDH活性（651±43.51 U·L-1）明显增强，而TPCK预处理组LDH活性（542±47.50 U·L-1）显著低于PMA刺激组。6.iNOS含量检测：正常对照组、PMA组、TPCK预处理组、Rottlerin预处理组的iNOS含量分别为：0.596±0.077 U·ML-1、1.982±0.107 U·ML-1、1.227±0.085U·ML-1、0.850±0.068 U·ML-1，PMA组与其它各组及两阻滞组相比均有显著性差异（P＜0.05）。7.免疫细胞化学法检测结果显示：正常对照组细胞胞浆中无棕黄色颗粒物，PMA组多数细胞胞浆中出现棕黄色颗粒物，TPCK预处理组、Rottlerin预处理组胞质中出现棕黄色颗粒物的细胞数明显减少，而Rottlerin的阻滞结果更显著。　　结论：1、PKC的激活促进了培养神经元中 NF-κB的活化和iNOS的表达。　　2、PKC可以通过对NF-κB的活化而参与神经元的损伤作用。　　3、PKC特异性抑制剂Rottlerin和NF-κB特异性抑制剂TPCK对神经元损伤具有保护作用。