利用T-DNA插入突变体研究逆境胁迫下AtSIS的作用

来源 :哈尔滨师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sxtld
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固有无序蛋白质是一类生理条件下没有稳定的高级结构,但能行使正常生物学功能的蛋白质,广泛存在于真核生物中。固有无序蛋白质在植物逆境响应过程中起重要作用。AtSIS基因编码的蛋白质是一种固有无序蛋白,其与逆境胁迫有关但功能未知。本文对AtSIS蛋白质的无序特性、AtSIS基因对植物逆境胁迫的应答进行了研究。  通过生物信息学手段对AtSIS分析显示,AtSIS蛋白含有丰富的促无序氨基酸Ser,而疏水性氨基酸含量较少。对AtSIS蛋白无序度及蛋白质互作的分析显示,该蛋白含有3个无序区,与其靶蛋白的结合区域可能位于无序区。蛋白质翻译后的磷酸化位点主要是长无序区的Ser残基。  以AtSIS的7个不同T-DNA插入突变体为材料,用“三引物”法筛选获得其中5个T-DNA插入纯合体。它们在AtSIS上的插入位点不同,可分为3类,1个插入5’UTR区、3个插入外显子区、1个插入内含子区。  克隆AtSIS的CDS序列,通过中间载体pMD18-T,与pCAMBIA1303相连,构建AtSIS植物表达载体。蘸花法转化野生型拟南芥,筛选获得AtSIS过表达转基因植株,为深入研究AtSIS功能提供资源。  对拟南芥野生型和AtSIS T-DNA插入缺失突变体纯合体进行芽期、苗期和花期NaCl、PEG和ABA胁迫,发现T-DNA不同插入类型对胁迫的敏感度不同。对于AtSIS共表达基因的生物信息学预测分析表明AtSIS与ABA信号路径相关。  qRT-PCR结果显示,AtSIS在逆境胁迫中是一个早期应答基因,该基因的表达模式与已知基因At1g69490和At2g18700的表达模式一致;研究AtSIS与二者之间的关系表明,AtSIS的表达抑制了At1g69490和At2g18700的表达,说明AtSIS可能是逆境响应下At1g69490和At2g18700的上游调控基因;对共表达基因的抑制可能与AtSIS在逆境胁迫下起着负调节的作用有关。
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