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Hsp70-2和Hsc70t是小鼠睾丸特异性表达的两种热休克蛋白70家族成员，它们均在精子发生的减数分裂期表达。为进一步研究其功能，本研究根据Genbank中小鼠的hsp70-2和hsc70t的cDNA序列设计了特异性引物，以由睾丸中提取的总DNA为模板，采用PCR方法克隆其基因序列，利用DNAStar等软件对其进行序列和抗原表位分析;利用内切酶EcoRⅠ和HindⅢ酶切hsp70-2基因，将切下的目的片段插入pET-32a(+)载体，构建pET-32a(+)/hsp70-2重组质粒。重组质粒经PCR和酶切鉴定为阳性后，转化宿主菌E.coliBL21。利用IPTG诱导表达，并摸索最佳的诱导条件。通过SDS-PAGE电泳和Westernblot对重组蛋白进行分析和鉴定，并利用亲和层析提纯蛋白。以昆明雄性小鼠为受试动物，分别用近似阴囊温度(33℃)、腹温(37℃)和超高温(42℃)三个温度组，应激处理4h，然后提取睾丸总RNA，以18SrRNA引物作为内标，用半定量RT-PCR检测热应激小鼠睾丸内这两种基因的mRNA的表达水平。试验结果如下:
1.用PCR方法成功克隆了1902bp的小鼠睾丸hsp70-2开放阅读框（GenBank登录号为FJ434401），经BLAST分析，与GenBank已发表的序列同源性为99.6％，共有7个位点发生突变，氨基酸序列同源性为99.2％，蛋白抗原表位预测结果显示，该蛋白72～113(aa)、222～292、494～541、556～605区域存在优势抗原表位的可能性最大。SDS-PAGE电泳显示，原核表达产物分子质量约为90kD，与预计大小相符，对表达重组蛋白进行可溶性分析，证实该蛋白仅以包涵体形式存在。最佳诱导条件为:0.15mmol/LIPTG，30℃，6h;经Westernblot试验进一步证实，该重组蛋白具有小鼠Hsp70-2反应原性。
2.用PCR方法成功克隆了1926bp的小鼠睾丸hsc70t开放阅读框（GenBank登录号为EU549780），经BLAST分析，与GenBank已发表序列同源性为99.9％，共有2个位点发生突变，氨基酸序列同源性为99.9％，蛋白抗原表位预测结果显示，该蛋白30～42(aa)、154～165、245～370、494～605区域存在优势抗原表位的可能性最大。
3.用18SrRNA做内标对小鼠热应激睾丸内两种基因mRNA的表达进行半定量分析显示:随着热应激温度的升高，小鼠睾丸hsp70-2mRNA相对转录水平逐渐下降，且各热应激组均显著(P＜0.05)低于对照组;随着热应激温度的升高，小鼠睾丸hsc70tmRNA相对转录水平逐渐升高，且各热应激组均显著(P＜0.05)高于对照组，42℃组hsc70tmRNA相对转录水平达到对照组的1.42倍。