Candida rugosa脂肪酶(CRL)是重要的工业酶制剂品种之一,可以催化脂解、酯交换、酯合成等反应,广泛应用于油脂加工、食品、医药、日化等工业。本文对该菌生产脂肪酶的发酵培养基组成成分进行了系统的筛选和研究。利用生物统计学方法优化了培养基的组成,考察了不同碳源、氮源和无机盐对菌体产酶的影响。发现国产蛋白胨、麦芽糖对于产酶有显著影响,并最终确定了这两者对于菌体产酶的最优值。与国产YPD培养基发酵相比,优化后的培养基使发酵液中CRL酯酶活性提高约500U/mL,达到并稍微高出国外进口YPD培养基的发酵水平。用廉价的国产培养基代替昂贵的进口培养基进行发酵生产将大大降低生产成本。此外,商业Candida rugosa脂肪酶含有五个同工酶(Lip1-Lip5),成分复杂,不利于深入研究。由于它们之间的高同源性,性质相近很难将其分离,因此,克隆并异源表达是最理想的办法。我们通过已知的核酸序列设计引物从基因组中吊取Lip1基因。利用交错延伸PCR将19个编码Ser的CTG密码子中的17个突变为毕赤酵母能够识别的TCT密码子,保证其在毕赤酵母等宿主中表达出有活力的脂肪酶,为今后的异源表达奠定了基础。