自由基清除剂Tempol对小鼠放射性下颌腺损伤防护机制的研究

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目的:放射性下颌腺损伤是头颈部肿瘤患者放疗后常见的并发症之一,目前尚缺乏有效的防治措施。文中探讨自由基清除剂Tempol (TPL)对小鼠放射性下颌腺损伤的防治作用,并初步探讨其作用机制。方法:1.构建放射性下颌腺损伤模型:80只雄性C57bl/6小鼠,随机数字表法分为空白对照组,单纯照射组,TPL单药组和TPL+照射联合组,4个组,每组20只。给予6MeV X线,15Gy大剂量单次照射小鼠头颈部,构建小鼠放射性下颌腺损伤模型;2.给药时间和方法:照射前10min开始,单药组和联合组给予TPL溶液,按照200mg/kg腹腔注射给药,空白对照组和单纯照射组给予等体积溶剂腹腔注射。3.观察药后30d小鼠存活率和体重变化;分别于照射后3天和30天采集小鼠唾液,计算小鼠唾液流率;4.收集照射后3天小鼠下颌腺匀浆后进行总超氧化物歧化酶活性(SOD)、总谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量测定;5.病理组织形态学观察;6.采用TUNEL法检测照射后3和30d小鼠下颌腺组织细胞凋亡数检测;7. Western Blot发检测照射后3d下颌腺组织Bcl-2、Bax、caspase3蛋白表达水平;8.免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白表达的分布。结果:1.照射后3和30d单纯照射组小鼠唾液腺流率分别为5.67±1.05,5.27±1.34,与200mg/kgTPL+照射组比较,明显降低,差异有统计学意义(F=226.4,215.3,P<0.05);2.对于单放组小鼠下颌腺,在照射后3d,最明显的改变是腺泡细胞空泡化变性,在照射后30d,最为明显的变化是局部纤维化;而联合组在照射后3d和30d表现更加明显的分叶结构,较少的空泡状变性。单药组在所有观察时间点腺泡和导管结构清晰、完整,细胞核未见明显异常变化;3.照射后3d,联合组下颌腺组织的MDA的含量,明显较单放组降低,差异有统计学意义(P<0.05);照射后3d,联合组下颌腺组织的GSH的含量和SOD的活性,明显较单放组增加,差异有统计学意义(P<0.05);3.照射后3d和30d,联合组下颌腺组织细胞凋亡数均比单放组降低,差异有统计学意义(P<0.05);4. Western Blot法和免疫组化检测结果表明,200mg/kgTPL处理引起照射后3d小鼠下颌腺组织中的Bcl-2蛋白表达显著升高,而Bax和断裂caspase3蛋白显著下降。结论:TPL对小鼠下颌腺组织具有放射保护作用,其机制可能为减轻组织氧化应激和调节线粒体凋亡信号通路。
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