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苹果是全世界种植最广泛的重要水果之一。中国无论在苹果种植面积还是产量方面都是世界第一。陕西省是中国的苹果大省,种植面积约600000公顷,产量约占全世界的12%。然而,苹果病毒病的发生却严重影响着苹果的产量和质量。在中国,侵染苹果的主要病毒有苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus, ASGV)、苹果茎痘病毒(Applestem pitting virus, ASPV)和苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)。其中苹果茎沟病毒属于发形病毒属,在全世界范围内发生。本研究于2011-2012年,建立了一种快速、灵敏的检测苹果茎沟病毒的方法,并扩增得到了苹果茎沟病毒的全基因组序列(ASGV-SHX),其全长为6495bp。基于其全基因组序列以及其外壳蛋白基因的序列以及其它已报道的苹果茎沟病毒序列构建了其系统进化树,分析了其遗传多样性。据我们所知,这是在中国首次报道苹果茎沟病毒的全基因组序列。研究发现,苹果茎沟病毒的基因组RNA包含两个开放阅读框:ORF(16.3kb)和ORF2(1kb),分别编码241和36kDa的蛋白。ORF1编码一个多聚蛋白,ORF2编码运动蛋白和蛋白酶基因。苹果茎沟病毒中国分离物的全基因组核苷酸序列与GeneBank已报道的苹果茎沟病毒序列比对发现,ASGV-SHX与日本已报道的登录号为NC0011749的序列同源率最高为86%。外壳蛋白基因与登录号为D16681和AB004063的序列同源率最高为93%。外壳蛋白基因是苹果茎沟病毒最保守的基因。外壳蛋白的系统进化分析发现,全世界的苹果茎沟病毒分为三个组,每一个组都含有中国的分离物。其中第一组分离物的寄主全部是苹果,主要来自中国、日本、印度、巴西以及韩国。第二组分离物全部来自中国。第三组大部分来自中国,还有美国。各分离物无明显的地理差异,而有一定的寄主差异。为了进一步了解该病毒,本研究构建了其侵染性克隆载体。然后利用农杆菌介导的方法侵染4周龄左右的昆诺藜。对昆诺藜叶片检测结果发现,接种叶片可以检测到该病毒,而接种叶上部的叶片则检测不到。这表明,所构建的侵染性克隆载体可以在昆诺藜内完成转录的过程,而不能表达蛋白。这可能是由于载体5’端没有帽子结构,导致转录的RNA易降解,不能翻译蛋白所致。下一步我们可以将ASGV的全基因组构建到T7启动子载体上,然后利用体外转录的方法,在5’端加上帽子类似物,然后转录昆诺藜,来验证其是否有活性。