阿片及其受体在伤害性信息传入引起的大鼠脊髓后角星形胶质细胞激活中的作用

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目的:疼痛是一种与组织损伤相关的不愉快的主观感受和情感体验,发生在脑的高级部位尤其是大脑皮层,是人类所特有的。它提供躯体受到威胁时的警报信号,是生命不可缺少的一种保护功能。另一方面,严重的疼痛困扰着数以百万计的人们,是临床一大难题。 传统的观点认为,疼痛调节仅由神经元来完成,然而用完全由神经元参与的模型却无法解释一些疼痛现象,如“镜影痛”等。近来的研究发现,除神经元外,脊髓胶质细胞的激活与疼痛持续状态和痛觉过敏的产生有密切关系。例如,皮下注射完全福氏佐剂、甲醛及酵母多(聚)糖均可引发大鼠中枢神经系统星形胶质细胞表达上调和痛觉过敏,而抑制胶质细胞的激活则可防止痛敏的产生;另外,外周神经损伤还可使星形胶质细胞mRNA长时程表达增强。以上资料从细胞、分子水平揭示,伤害性信息的传入、整合可能与星形胶质细胞密切相关。 阿片及其衍生物在神经系统中具有很强的镇痛作用,阿片受体广泛分布于脊髓后角浅层。研究证实,星形胶质细胞具有包含阿片受体在内的神经肽受体及乙酰胆碱、多巴胺、肾上腺素、5-羟色胺等神经递质的受体,并且能够被P物质、ATP、CGRP等痛觉相关肽激活,从而参与痛调制过程。而阿片及其受体在胶质细胞参与伤害性信息整合过程中的作用如何,尚未见相关报道。因此,本实验首先观察了角叉菜胶炎性痛及痛过敏过程中脊髓后角GFAP表达的时程变化特点,进而鞘内注射μ阿片受体激动剂吗啡观察脊髓后角GFAP表达的变化,以初步探讨μ阿片受体在角叉菜胶炎性痛及痛过敏过程中星形胶质细胞GFAP表达变化的作用及意义。 方法:大鼠右后足掌面皮下注射1%角叉菜胶0.1ml复制炎性疼痛模型;鞘内注射于L5和L6椎间隙进行。于预定时间断头取材,制备组织切片进行GFAP免疫组化染色。数据用均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS统计软件进行单因素方差分析和配对t检验,以P<0.05作为判断差异显著性的标准。 结果:1角叉菜胶炎性痛及痛过敏诱导大鼠脊髓后角GFAP表达增加 健康雄性SD大鼠35只,随机分为5组,分别为对照组、角叉菜胶3h组、角叉菜胶6h组、角叉菜胶12h组、角叉菜胶24h组。其中对照组不加任何处理,直接断头取材;角叉菜胶3h、6h、12h、24h组分别于注射角叉菜胶后不同时间,直接断头取材,进行L5脊髓后角GFAP免疫组化染色。 结果发现,对照组大鼠L5脊髓后角Ⅰ-Ⅱ板层GFAP免疫阳性细胞体积较小,突起短细;并且阳性细胞数目较少,染色较浅,左右两侧无明显差异。角叉菜胶3h组、6h组、12h组GFAP免疫阳性细胞数目、面积、积分光密度均较对照组显著增加(P<0.05),其中角叉菜胶6h组增加最为明显,且注射部位同侧GFAP免疫阳性细胞数目、面积、积分光密度均较对侧显著增加(P<0.05);角叉菜胶24h组GFAP免疫阳性细胞数目、面积、积分光密度基本恢复至对照组水平,两侧无显著性差异。 2μ受体激动剂吗啡抑制角叉菜胶炎性痛及痛过敏时大鼠脊髓后角GFAP表达的增加 健康雄性SD大鼠28只,随机分为4组,分别为对照组、角叉菜胶6h组、角叉菜胶+生理盐水组、角叉菜胶+吗啡组,其中吗啡的应用剂量为5μg/10μl。角叉菜胶6h组、角叉菜胶+生理盐水组、角叉菜胶+吗啡组均于注射角叉菜胶后6h直接断头取材。其中角叉菜胶+生理盐水组和角叉菜胶+吗啡组于注射角叉菜胶前15分钟鞘内注射10μl生理盐水或吗啡溶液。 结果发现,足底注射角叉菜胶溶液后,动物迅速出现早期的伤害性反应,如舔、摇动后掌,后掌抬离盒底面等。鞘内注射吗啡可明显抑制角叉菜胶诱发的自发痛反应,角叉菜胶+吗啡组大鼠于注射角叉菜胶后15min舔咬注射侧脚掌频率即开始明显降低(P<0.05),至注射角叉菜胶后60min仍明显低于角叉菜胶+生理盐水组(P<0.01)。角叉菜胶6h组和角叉菜胶+生理盐水组GFAP免疫反应阳性细胞的数目、面积、积分光密度无明显差异,但均较对照组显著增加(P<0.05)。角叉菜胶+吗啡组与角叉菜胶+生理盐水组相比,阳性细胞的数目、面积、积分光密度均明显降低(P<0.05)。 结论:在角叉菜胶炎性痛及痛过敏过程中,脊髓后角GFAP表达增加,这种增加于注射角叉菜胶后6小时最为显著。鞘内注射吗啡可作用于μ受体而显著抑制大鼠后掌注射角叉菜胶引起的脊髓后角GFAP表达的增加,表明μ受体在脊髓水平参与了星形胶质细胞对伤害性信息的调制过程。
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