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干扰素诱导的跨膜蛋白家族,又被称作IFITM家族,最近的研究表明其具有一定的抗病毒作用,本研究首先设计了克隆ifitm1, ifitm2, ifitm3三种基因的上下游引物,在再通过以IFN-α作为诱导剂,诱导人胚肾293T细胞胞内表达IFITM1, IFITM2, IFITM3三种目的蛋白,通过RT-PCR方法,克隆ifitm1, ifitm2, ifitm3三种基因,并将扩增产物连接至pMD18-T-sinple载体上,通过测序验证重组质粒的正确性,然后进一步将目的基因切下连接至pVAX1载体,通过转染试剂,将重组质粒转染致293T细胞,通过RT-PCR、 western-blot和IFA实验验证重组质粒在细胞内的表达情况,并命名为pV-IFITM1, pV-IFITM2, pV-IFITM3。利用pLP1, pLP2, pNL-EGFP, pLP-VSVG四质粒系统包装VSV-G假病毒,并通过RT-PCR及细胞感染实验,验证4质粒包装病毒是否成功。将上述构建正确三种质粒pV-IFITM1, pV-IFITM2, pV-IFITM3分别转染293T细胞,建立过表达IFITM1, IFITM2, IFITM3的293T细胞,然后用上述包装出的VSV-G’漫病毒分别感染过表达IFITM1, IFITM2, IFITM3蛋白的293T细胞,通过western-blot试验检测VSV-G假病毒感染细胞后,表达标志蛋白EGFP的情况,从而确定IFITM1, IFITM2, IFITM3蛋白对VSV-G假病毒的抑制效果。通过以上方法,本实验成功从293T细胞中克隆出ifitml, ifitm2, ifitm3三段目的基因,基因片度约400bp左右,并将三段目的基因连接到pMD18-T载体上,经测序结果显示正确,证明目的基因克隆成功,进一步将目的基因连接到pVAX1载体中,经酶切鉴定,目的基因和载体片段显示完全正确,证明分别含有ifitm1, ifitm2, ifitm3基因的重组质粒pV-IFITM1, pV-IFITM2, pV-IFITM3构建成功,转染293T细胞后能够在真核细胞中表达目的蛋白,并且在研究中我们发现,过表达IFITM2、IFITM3蛋白的293T细胞比没有过表达IFITM2、IFITM3蛋白的细胞的抗VSV-G慢病毒感染的能力比较明显,但过表达IFITM1蛋白的293T细胞与没有过表达IFITM1蛋白的细胞的抗VSV-G慢病毒感染的能力无明显变化,说明IFITM蛋白家族的IFITM2和IFITM3蛋白对VSV-G慢病毒的感染具有一定的直接或间接的抑制作用,但IFITM1对VSV-G假病毒的抑制效果不明显,但是,有文献报道,IFITM1对肿瘤的生长具有一定的一种效果,当然这也是我们未来的一个研究方向,以及进一步探索有关IFITM蛋白家族的抗病机理及生物学功能。