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本研究利用SMART、RACE技术,成功分离了四个中国莲过氧化物酶基因(NnsAPX、NnCPX、.NnTPX和NnGPX)的cDNA。其中:
1、NnsAPX基因的cDNA5L端有60个碱基的非编码序列,3′-端有368碱基的非编码序列。开放读码框为1044bp,编码347个氨基酸组成的多肽。
2、NnCPX基因的eDNA 5′-端有22个碱基的非编码序列,3′-端有380碱基的非编码序列。开放读码框为996bp,编码331个氨基酸组成的多肽。
3、NnTPX cDNA 5′-端有117个碱基的非编码序列,3′-端有167碱基的非编码序列。开放读码框为489bp,编码162个氨基酸组成的多肽。
4、NnGPX基因cDNA 5′-端有126个碱基的非编码序列,3′-端有258个碱基的非编码序列。开放读码框为513bp,编码170个氨基酸组成的多肽。
利用半定量RT-PCR方法,分析了莲光系统基因.NnLhcb4在莲蓬遮光和不遮光两种条件下种子发育过程中的表达情况。研究表明:莲种子在受粉后正常光照条件下发育过程中,胚芽中NnLhcb4表达呈递增趋势,到20 DAP时,NnLhcb4mRNA的水平达到最大值,此后,mRNA的水平随着种子的成熟逐渐减少一直到30 DAP时;从15~25 DAP时,在子叶中,检测到NnLhcb4有微量表达。莲种子在受粉后遮光发育到15~20天时,在胚芽中检测到NnLhcb4表达,但其mRNA的水平跟莲种子同时期不遮光发育时期相比,则显得很低。
利用Sollthern blot技术,分析NnLhcb4基因在基因组中约有6~7个拷贝。