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目的:本实验应用补阳还五汤(buyang huanwu decoction,BHD)灌胃干预少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein peptides,MOG 35-5)5免疫诱导的C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型,观察各组临床症状、病理变化、神经损伤,以及BHD对中枢神经系统(central nervous system,CNS)和外周免疫系统的影响。探讨研究BHD对EAE的治疗效果及其可能的作用机制,为临床上治疗多发性硬化提供理论和实验依据。方法:C57BL/6雌性小鼠24只,采用髓鞘MOG35-55诱导建立EAE模型,随机分为EAE对照组、BHD治疗组,各组12只。免疫后第三天开始灌胃给药,EAE对照组给予生理盐水,BHD治疗组给予BHD,至免疫后27天,每天观察并记录两组小鼠的体重变化和临床症状。免疫后的第28天(p.i.28)处死动物,无菌分离脾脏淋巴细胞,制备细胞混悬液。ELISA法测定上清液中细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α的水平,流式细胞术(Flow Cyto Metry,FCM)检测脾脏T淋巴细胞及巨噬细胞表型的表达情况。脊髓冰冻切片进行HE染色、髓鞘染色及采用免疫荧光组织化学染色检测CD4、CD68、GFAP、BDNF、GDNF、NG2、Neun、MBP、MAP-2;Western blot法检测脊髓TLR4信号通路因子TLR4、Myd88、p-NF-κB/p65、p-38、JNK。所得实验数据采用分析软件Graphpad Prism 5.0进行统计分析处理。结果:1.MOG35-55抗原乳剂免疫成功诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型。与EAE对照组小鼠比较,BHD治疗组不仅可以推迟EAE的发病时间,还可以减轻EAE的临床症状,抑制EAE小鼠体重丢失(p<0.05,p<0.01,p<0.001)。2.BHD治疗减轻EAE小鼠髓鞘脱失,促使NG2表达增加,说明BHD对EAE导致的髓鞘损伤,具有保护和修复作用(p<0.05)。3.BHD促进NeuN和MAP 2的表达,保护神经元的完整性(p<0.05)。4.BHD促进神经营养因子的表达。与EAE对照组小鼠相比,BHD促进BDNF、GDNF的表达(p<0.05)。5.BHD减轻CNS炎性细胞的浸润。HE染色和免疫荧光组织化学染色观察到EAE CNS有不同程度的炎性细胞浸润。BHD可以减轻CNS CD4+、CD68+炎性细胞的浸润(p<0.05)。6.BHD抑制星形胶质细胞的在脊髓的聚集,与EAE对照组小鼠相比,BHD组GFAP细胞明显低于对照组(p<0.05)。7.BHD可以抑制TLR4信号通路,降低TLR4、Myd88、p-38、p-JNK、p-NF-κB/p65的表达(p<0.05)。8.BHD可以调节外周免疫,下调炎性T细胞、巨噬细胞的表达,并对抗炎性细胞的表达具有上调趋势,同时抑制外周炎性细胞因子的释放。与EAE对照组比较,BHD可以下调外周免疫系统中CD4+IL17+、CD11b+IL-12+、CD11b+CD16/32+细胞的表达,上调CD4+CD25+、CD4+IL-10+、CD4+TGF-β+、CD4+IFN-γ+细胞的表达,抑制炎性细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α的释放(p<0.05)。结论:MOG35-55抗原乳剂免疫成功诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型。BHD对EAE具有良好的治疗效果,BHD可以延缓EAE的发病,减轻EAE临床症状,减轻髓鞘脱失,修复髓鞘损伤,促进髓鞘再生。同时,BHD促进神经营养因子的表达,发挥神经保护作用。BHD可以减轻脊髓炎性细胞的聚集,调节外周免疫系统,促进Th1向Th2,M1向M2的转化。因此,BHD的疗效机制可能与其抑制TLR4/NF-κB炎性信号通路的激活,以及抗炎、免疫调节和神经保护等作用有关。