由芸薹根肿菌（Plasmodiophora brassicae）侵染引起的根肿病是十字花科作物生产中最严重的一种土传性病害。根肿病发病范围广泛,在我国十字花科作物的主栽区几乎均有分布,导致作物产量大幅减少甚至绝收。近年来,通过施用化学药剂使根肿病得到了一定的控制,但此种方法容易污染环境且防治效果不稳定。选育大白菜抗根肿病新品种是一种性价比高、环境友好的选择,利用转基因技术验证大白菜抗根肿病基因的功能具有重要的意义。本实验室前期精细定位到2个能够编码TIR-NBS-LRR类的抗病蛋白的基因Bra012540和Bra012541作为CRb的候选基因,分析了2个基因在不同组织不同接菌时间点的差异表达情况,并且在拟南芥中过表达能够增强转基因植株对根肿病的抗性。在前期的研究基础上,本研究通过转基因技术验证了2个候选基因Bra012540和Bra012541的功能,首先将35S启动子驱动Bra012540和Bra012541基因表达的重组质粒转化到甘蓝型油菜‘Westar’上并进行抗病性鉴定,其次将Bra012540和Bra012541串联在一起构建了由两个基因自身启动子驱动表达的转基因植物表达载体并转化到大白菜自交系‘C-24’中,对获得的T1代转基因大白菜进行抗病性鉴定。主要研究结果如下:1.利用农杆菌介导法将过表达重组质粒p CAMBIA1300S-35S-Bra012540、p CAMBIA1300S-35S-Bra012541以及p CAMBIA1305.1-35S-Bra012540-Bra012541成功导入到油菜野生型‘Westar’中,从而获得了过表达转基因植株。利用PCR技术对筛选出的阳性植株进行根肿病抗病性鉴定发现,过表达转基因油菜的根部形态明显好于野生型对照,其发病率、病情指数以及根肿菌DNA含量均显著低于野生型对照,同时分析了根肿菌胁迫下过表达转基因油菜相关生理生化指标的变化,发现过表达转基因油菜根部的H202和MDA含量均显著低于野生型对照,过表达转基因油菜根部的CAT、SOD和POD酶活性均显著高于野生型对照。这些结果表明在油菜中过表达Bra012540和Bra012541基因均提高了转基因植株对根肿病的抗性。2.为了进一步验证Bra012540和Bra012541两个基因的功能,利用In-fusion无缝克隆技术将Bra012540和Bra012541串联在一起成功构建了由两个基因自身启动子驱动表达的载体p CAMBIA1301-Bra012541-Bra012540,同时以农杆菌（GV3101）为媒介,潮霉素（Hyg）为筛选标记,将构建的重组质粒导入到大白菜自交系‘C-24’中。经过PCR鉴定筛选后,共获得8棵T0代阳性转基因植株,并收获T1代种子。对筛选出的T1代阳性转基因植株进行抗病性鉴定发现,在根肿菌侵染后0 d、15 d、30 d、40 d四个不同时期下转基因大白菜的根部形态、发病率及病情指数与感病野生型对照‘C-24’接近一致,此外,根肿菌胁迫下Bra012541和Bra012540两个CRb候选基因在转基因大白菜中的相对表达量均非常低,说明在感病大白菜野生型‘C-24’中转入由基因自身启动子驱动表达的CRb抗性基因后并未明显改变转基因植株后代的表型。