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目的:本研究通过建立单纯性肥胖雌性小鼠模型,通过对小鼠体重、Lee’s指数和脂肪体积、ITT、GTT、血脂、肝功及脂肪因子等有关指标的检测以及小鼠肝脏和脂肪组织的形态学的观察,来分析化积健脾汤对其减重降脂的影响。进一步检测脂肪和肝脏组织的瘦素受体(LepRb)基因表达及其对AMPK-ACC-CPT1信号通路的影响,探讨化积健脾汤对单纯性肥胖雌性小鼠的减肥降脂的作用机制。方法:1.单纯性肥胖小鼠模型的建立:选取3周龄C57BL/6C雌性小鼠120只,适应性饲养一周后,随机选取100只小鼠给予高脂饲料喂养10周进行造模,其余20只小鼠采用普通饲料喂养。每周对小鼠进行体重称量,分别饲养10周后,对小鼠体长进行测量;选取高脂饲料组中体重高于普通饲料组小鼠的20%以上者归为模型组。分别选取普通饲料组(即正常组)小鼠10只和模型组小鼠10只,行ITT、GTT实验;并通过Micro-CT和全自动生化分析仪检测两组小鼠的脂肪体积和血脂水平;Elisa法测定血清脂肪酸、胰岛素及脂肪因子Lep、ADP、IL-6的含量。2.取正常组(10只),44只模型组小鼠随机分为模型空白组10只、奥利司他组(即西药组)9只、化积健脾汤低剂量组(即低剂量中药组)8只、化积健脾汤中剂量组(即中剂量中药组)8只和化积健脾汤高剂量组(即高剂量中药组)9只。正常组和模型空白组均给予蒸馏水,给药组分别给予相应浓度药物灌胃。6周后,统计小鼠体重及Lee’S指数;通过Micro-CT法测定小鼠的脂肪体积及分布情况;全自动生化分析仪检测小鼠血清中TC、TG、LDL、HDL和血糖的含量;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清FFA、INS及脂肪因子Leptin、ADP和IL-6的含量;HE染色观察脂肪和肝脏组织学形态。3.运用实时荧光定量RT-PCR检测小鼠肝脏和脂肪组织中LepRb、AMPK、CPTI、ACC的mRNA表达。结果:1.饲养10周后,模型组小鼠的体重和Lee’S指数均高于正常组小鼠;GTT和ITT实验发现模型组小鼠在每个检测的时间点血糖值都比正常组高,GTT显示,分别在30、60、90及120分钟差别具有统计学意义(P<0.05);ITT显示,在0、30、60、90、120分钟时差别具有统计学意义(P<0.05)。血生化指标中,与正常组小鼠相比,模型组小鼠TC、TG、LDL、ALT、AST含量显著升高,HDL含量降低;ELISA指标中,与正常组小鼠相比,模型组小鼠FFA、IL-6、LEP、INS含量增高,ADP含量下降;此外,Micro-CT显示肥胖小鼠的皮下脂肪和腹腔脂肪体积显著高于正常组小鼠。证明单纯性肥胖小鼠造模成功。2.在对正常组、模型组以及给药组进行相应的灌胃处理。用药6周后,结果显示:(1)与正常组相比,模型空白组体重、Lee’S指数和脂肪体积显著升高;与模型组相比,给药组的体重、Lee’S指数和脂肪体积均有不同程度下降。(2)小鼠血生化指标检测与ELISA结果显示:与正常组小鼠相比,模型组中的TC、TG、ALT、AST、LDL、FFA、INS、LEP、IL-6水平均升高(P<0.05),HDL及ADP显著下降(P<0.05);与模型组相比,奥利司他组和化积健脾汤高剂量组、化积健脾汤中剂量组的TC、TG、LDL、ALT和AST水平降低(P<0.05),HDL水平升高(P<0.05),化积健脾汤低剂量组中TG、LDL、AST含量低于模型组,且有统计学差异(P<0.05);与模型组相比,4个给药组FFA、INS、LEP、IL-6水平均降低(P<0.05),ADP显著升高(P<0.05)。(3)由HE染色石蜡切片观察可知,模型组肝脏与正常组相比,脂滴数量明显增多,脂滴大小明显增大;与模型组相比,奥利司他组和化积健脾汤中剂量组、化积健脾汤高剂量组肝脏中脂滴含量明显减少;而化积健脾汤中药组效果不明显。与正常组比较,肥胖模型组脂肪细胞体积明显增大;与模型组比较,奥利司他组及化积健脾汤中剂量组、化积健脾汤高剂量组小鼠脂肪细胞体积有明显区别,显著变小;同时在单位视野内观察到的脂肪细胞数目也明显变多,而化积健脾汤低剂量组的效果不明显。(4)RT-PCR检测结果显示:模型组小鼠较正常组小鼠肝脏和脂肪组织中LepRb表达水平均显著降低(P<0.05),4个给药组的肝脏和脂肪组织中的LepRb表达水平相比于模型空白组均有不同程度的升高(P<0.05);与正常组比较,模型组小鼠肝脏和脂肪AMPK和CPT1含量表达也降低(P<0.05);与模型组相比,4个给药组小鼠肝脏和脂肪AMPK及CPT1含量升高(P<0.05);模型组较正常组小鼠肝脏和脂肪ACC表达升高(P<0.05),与模型肥胖组相比,4个给药组小鼠肝脏和脂肪ACC水平均降低(P<0.05)。结论:1.化积健脾汤可以抑制肥胖雌性小鼠的体重、Lee’S指数和体积,降低血脂TC、TG、LDL及血清FFA、INS、LEP、IL-6水平,升高血脂HDL及血清ADP水平,同时通过降低ALT和AST的含量来保护肝功损伤。2.化积健脾汤改善肥胖小鼠的脂质代谢可能通过上调脂肪和肝脏组织中的LepRb、AMPK、CPTI表达水平,抑制ACCmRNA的表达来实现的。