传统上膜联蛋白被定义为一种以钙离子依赖性方式与酸性磷脂结合的蛋白质,在大多数生物的细胞中,膜联蛋白是一种高丰度蛋白,占整个细胞蛋白质含量的0.5%～2%,其中膜联蛋白A家族成员广泛分布于高等脊椎动物中。大量的研究显示,膜联蛋白在胞吞、胞吐作用、细胞间以及细胞与细胞外基质间的相互作用、离子通道的形成、磷脂酶A2活性的抑制等多种生理过程中起作用,但是二十多年来的研究并没有能够就其生理功能得到一个明确的结论。长期以来人们发现膜联蛋白A家族成员与不同来源的良性、恶性肿瘤的发病机制相关,研究显示在多种癌症组织中A家族某些成员的表达水平都发生了明显的上调,然而另外一些资料显示在某些癌症的肿瘤生成、分化以及转移过程中膜联蛋白的下调可能起着重要的作用。遗憾的是迄今为止膜联蛋白A家族成员与肿瘤的发生、发展的确切关系及具体作用机制仍然不明确。大肠癌是世界范围内流行的一种恶性肿瘤,其恶性程度列第四位,仅次于肺癌、乳腺癌和前列腺癌。相关研究显示膜联蛋白A家族某些成员的表达在不同特征的大肠癌组织中发生了变化,提示它们可能在大肠癌的发生、发展过程中扮演者重要的角色,然而并没有强有力的证据证实它们在大肠癌发病过程中所起的作用,甚至于不同的研究者得到了互相矛盾的结果。因此我们认为有必要借助于一些较先进的技术手段,对膜联蛋白A家族成员在大肠癌中的表达情况及其作用机制进行系统、深入的探讨。首先,我们由正常人胎盘组织中克隆得到了膜联蛋白A1、A2和A5的基因编码区全长序列,并通过亚克隆技术将其装载入真核表达载体pcDNA3.1(+)。在与长海医院肛肠外科的协助之下,我们收集了36例病例完整、背景清楚的散发性大肠癌病人组织样本作为研究对象,同时获得了35例非恶性肠病样本作为对照。通过免疫组织化学实验,我们首先对肿瘤样本中p53、Ki-67这两个肿瘤临床诊断上较为常用的标志物进行了分析,并分别根据p53的突变情况和Ki-67增殖指数对36例肿瘤组织样本进行了归类。随后我们选择了目前功能较为清楚的膜联蛋白A5作为切入点,借助于荧光实时定量PCR和免疫组织化学等实验手段,分别从mRNA水平和蛋白质水平上对膜联蛋白A5在组织样本中的表达情况进行了检测。研究结果显示:膜联蛋白A5的表达水平在散发性大肠癌组织中发生了上调;同时A5在肿瘤组织中的表达变化情况与p53的突变和Ki-67增殖指数分别呈正相关。这一结果提示我们膜联蛋白A5与大肠癌的恶化、增殖等特征具有相关性,可能在其中起着重要的作用,并且膜联蛋白A5能够作为一种肿瘤标志物应用于大肠癌的临床诊断,因此具有临床应用的可能性。在组织水平研究的基础之上,根据文献的报道,我们选择了5种具备不同转移潜能的大肠癌细胞系(高转移潜能:SW620、LoVo,普通转移潜能:HCT116、SW480,低转移潜能:HT-29)。首先,通过Boyden小室实验对五种细胞系的侵袭、迁移能力进行检测,以验证之前对它们转移潜能的分析。随后通过荧光实时定量PCR和Western blot从mRNA水平和蛋白水平对膜联蛋白A家族重要成员A1、A2和A5的表达情况进行了检测。我们的结果显示不同的A家族成员在具备不同转移潜能的大肠癌细胞系中的表达情况互有差异(A1在高转移潜能的细胞中较高、A2在低转移潜能的细胞系中较高、A5的表达与细胞转移潜能的不具明显相关性),这一结果提示我们A家族膜联蛋白与肿瘤细胞的转移、凋亡等多个方面具有相关性,进而我们设想膜联蛋白A家族不同成员在各生理过程中的重要性并不相同,成员之间可能存在功能上的互补性。综上所述,本研究对膜联蛋白A家族的重要成员在不同特征的散发性大肠癌中的表达情况进行了系统的检测,并对其在大肠癌发生、发展中的作用机制进行了初步分析,我们的工作为今后更加深入的探讨膜联蛋白A家族与大肠癌发病机制的相关性以及膜联蛋白的生理功能打下了良好的基础。