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自从1981年HIV-1被发现以来,虽然对于HIV-1的治疗和预防开展了大量的研究工作,但是,迄今为止,仍然未有有效的预防性疫苗或治愈性手段的面世。在缺少有效的疫苗的情况下,HIV-1入侵抑制剂是一个很有潜力的替代性选择。目前,对于HIV-1入侵抑制剂已经取得了一些突破性的进展,但是仍然存在广谱性较差、抑制效果欠佳、副作用大以及存在抗性毒株等问题。因此,研究新型的HIV-1入侵抑制剂以及施药手段具有重要的理论和现实意义。 腺相关病毒(Adenovirus-associated Virus,AAV)载体系统能够转导目标基因进入细胞并得到长期稳定的表达。因此,将AAV载体与入侵抑制剂结合起来,如果能够在体内持续性地表达一种高效的入侵抑制剂,可以在一定程度上规避对传统疫苗的需要。 在前期研发的入侵抑制剂融合蛋白CLD(由sCD4分子和sDC-SIGN分子联合而成)的基础上,本研究构建了通过AAV载体转导CLD基因进入细胞的真核表达系统,通过Westernblot和ELISA实验证实,融合蛋白CLD的基因能够被转导进入细胞并且得到正确的表达,表明了通过AAV载体转导CLD基因进入细胞并进行有效表达的可行性。进一步研究发现,真核表达的融合蛋白CLD具有比原核表达的CLD更好的活力,对不同HIV-1毒株包括实验室适应株、原始分离株及早期传播/奠基株均有很好的抑制作用,且抑制作用优于单体分子sCD4、sDC-SIGN和CCR5模拟肽。以上结果表明,通过AAV系统转导真核细胞表达的融合蛋白CLD具有较好及广谱的抑制HIV-1感染的作用。 本实验首次利用AAV系统在真核细胞中表达入侵抑制剂-融合蛋白CLD并在原有的基础上对CLD进行了改造,验证了真核表达融合蛋白CLD的抑制效果。为融合蛋白CLD的后续应用研究奠定了理论和实验基础。