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树突状细胞(Dendritic cell,DC),作为机体功能最强的抗原提呈细胞(Antigen-presenting cell,APC),是连接天然免疫与适应性免疫的桥梁。根据DC的组织分布、表型和功能,分为多种亚群。各亚群之间及其与其它免疫细胞之间的有序合作和制衡,对于维持免疫应答和免疫自稳间的平衡至关重要。DC来源于骨髓造血干细胞,当机体处于稳定状态,根据发育过程中不同的DC前体,可以将其大致分为经典DC(Conventional DC,cDC)和分泌Ⅰ型干扰素(Ⅰ-Interferon,Ⅰ-IFN)的浆细胞样 DC(Plasmacytoid DC,pDC)亚群。各亚群 DC 分布于机体各淋巴组织(胸腺、脾脏、淋巴结)、循环以及外周组织,但所占比例极低。单核细胞在炎症因子或其它病理因素的存在下,可以分化为单核来源DC(Monocyte-derived DC,MoDC)以及产生肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)和诱导性 NO(Nitric oxide,NO)合成酶的 TipDC(TNF and inducible NO synthase-producing DC,TipDC)。目前认为,cDC和单核细胞均来自于骨髓中定向的髓系前体细胞(Common myeloid precursor,CMP)。CMP进一步分化为巨噬细胞/DC前体细胞(Macrophage-DC precursor,MDC)后,分化为2支,一支继续向DC分化,最终成为各亚群cDC,另一支则分化为单核细胞。pDC可分别来自于CMP和定向淋巴系前体细胞(Common lymphoid precursor,CLP)。其中,FMS样酪氨酸激酶3(Fms-like tyrosine kinase 3,FLT3)是公认的在cDC和pDC分化过程中关键的细胞因子,而炎性因子粒巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)是MoDC生成的主要细胞因子。围绕核糖体“隧道”结构周边的“辅助伴侣”蛋白,参与介导新生肽链的“辅助翻译”过程(分拣、折叠、共价修饰等)。这类蛋白存在于较为保守的异二聚体复合物,酵母中为核糖体相关复合物(Ribosome-associated complex,RAC),哺乳动物中为哺乳动物核糖体相关复合物(Mammalian ribosome-associated complex,mRAC)。其主要组成为含J功能域的蛋白及热激蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)同源分子,前者在酵母中称Z-DNA结合蛋白(Z-DNA binding protein 1,Zuotin/Zuo1),在人类细胞中为细胞周期蛋白11(M-phase phosphoprotein 11,MPP11);后者在酵母中为Ssz1,在人类细胞中则为本室上世纪90年代发现并命名的热激蛋白70样分子1(HSP70-like molecule 1,HSP70L1),国际命名为 HSPA14。MPP11由621个氨基酸残基构成,其N端是保守的J功能域,C端则包含2个重复的SANT功能域样的结构域。MPP11在胞浆和胞核中的两种分布决定了其不同的生物学功能。HSPA14则主要分布于胞浆,一旦细胞处于应激状态时,胞内的HSPA14也可以释放到胞外。通过http://www.genecards.orrg网站,发现HSPA14与MPP11的组织分布极为相似,在外周血中高表达于单核细胞,而很少表达在分化终末的中性粒细胞,在外周的睾丸、卵巢等生殖组织,以及胚胎期的脑、肝、心脏等组织有较高水平的表达。由此可猜想,HSPA14与MPP11可能在胚胎发育以及髓系来源细胞分化中可能发挥着重要作用。此外,MPP11作为近几年新认定的一种髓系白血病相关抗原,也提示着它参与髓系来源细胞的分化过程。在本课题中,我们以单核来源DC为研究对象,运用流式细胞表面及胞内标记、免疫共沉淀、siRNA转染、病毒转染等实验技术,发现:在人MoDC分化发育的过程中,HSPA14与MPP11的表达都存在早期表达快速降低,中晚期表达逐渐上调的现象。对于HSPA14与MPP11在细胞中的定位研究中发现,HSPA14在MoDC分化中后期主要分布在胞浆;MPP11在中期开始至后期,存在胞浆和胞核两种分布,以胞核分布占主导。HSPA14与MPP11之间具有相互作用,并且表达存在一定的联动性,在MoDC分化中晚期,沉默其中一方的表达,另一方的表达也受到抑制。在MoDC分化的早期,过表达HSPA14与MPP11能够显著降低MHC、共刺激分子以及黏附分子的表达,从而抑制MoDC分化;在中晚期沉默HSPA14与MPP11后这些分子的表达则显著上调,说明,HSPA14与MPP11是单核细胞向DC分化的负向调控因子。此后,初步的机制研究发现,MoDC分化早期过表达HSPA14与MPP11能够抑制STAT家族成员中STAT1、STAT3、STAT5、STAT6的组成型表达以及其磷酸化水平;分化晚期沉默HSPA14与MPP11则使它们的表达上调。本研究发现了“辅助伴侣”分子-HSPA14与MPP11的新功能,负向调控单核来源DC的分化!基于此,阐述了 HSPA14与MPP11在此过程中的表达规律、相互作用、亚细胞分布以及初步的作用机制,为进一步揭示它们在细胞分化中的调控作用以及作用机制的研究奠定了基础。