PRRSV毒株的分离鉴定及单克隆抗体的制备

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猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的一类传染性疾病,以母猪流产、仔猪死亡及呼吸系统紊乱为临床特征。自1987年首次发现以来,PRRSV一直对养猪业造成严重危害。1996年我国首次分离到北美洲型的PRRSV毒株,2006年国内猪场暴发的重大疫情为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)感染所致,同经典毒株相比HP-PRRSV产生了新的进化分支,致病性更强。本课题初步研究了中原地区近期PRRSV的变异情况。对2011~2012年间从河南及周边省份发病猪场分离的8株PRRSV毒株Nsp2基因变异区进行了RT-PCR扩增,同时对主要结构蛋白GP5基因进行克隆测序并与GenBank中登录的我国历年来流行的PRRSV代表毒株的GP5蛋白序列进行了遗传进化分析,对主要氨基酸基序进行了比对分析。结果表明,2011~2012年在中原地区分离的8株PRRSV分离株均为Nsp2缺失变异株,GP5基因与2006年我国高致病PRRSV代表毒株JXA1同源性较高。将实验室2007年分离的HP-PRRSV毒株HN07-1与8株实验分离株进行了ORF5基因比对分析,发现同源性高达96%以上,且HN07-1株毒力较强。为了进一步研究HP-PRRSV的检测方法和防控手段,对HN07-1株进行了病毒增殖与纯化,筛选出一株分泌抗HP-PRRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为mAb-2H,实验为HP-PRRSV快速检测体系的建立奠定了初步基础。
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