树突状细胞（dendritic cell, DC）是专职抗原呈递细胞，能够启动和维持组织器官的免疫炎症反应。当机体受到细菌或病毒感染时，体内DC的数量会发生变化，故而引起免疫系统的不同免疫状态变化，但目前病原微生物导致 DC数量改变的分子机制尚不明确。作为革兰氏阴性菌的胞壁物质，脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）是刺激机体免疫反应的主要成分。在探究DC的数量与存活机制时，我们发现LPS能够促进DC凋亡时抗凋亡基因的表达，提高DC存活。据此，本硕士课题围绕LPS调控DC存活这一科学问题进行了一系列的研究。　　首先，因 DC为骨髓源细胞，我们在体外向小鼠骨髓的造血干细胞中加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）以获取 GMDC，同时应用流式分析监测GMDC从造血干细胞发育的全过程。结果显示：造血干细胞在GM-CSF的作用下，先有CD11c+细胞的分化（第一天），后有明显的细胞增生（第三天）。体外培育第七天后DC的分化和增生基本结束，第九天开始发生部分死亡。GMDC在发育的第七天为MHCII分子表达量较低的非成熟DC，经LPS刺激后其表面的MHCII分子及共刺激分子CD40、CD80表达增高，为成熟DC。　　在对分化的GMDC进行细胞因子撤除所诱导的细胞凋亡实验中我们发现LPS刺激的DC比未经LPS刺激的DC存活细胞数显著增多。进一步研究发现这一现象不是由于LPS刺激细胞增生过多导致，而是由于LPS诱导细胞凋亡减少所致。　　为找出LPS抑制DC凋亡的分子机制，我们运用RT-PCR技术和蛋白免疫印迹技术分别检测 LPS处理前后 GMDC中抗凋亡相关基因Bcl-2、A1、Bcl-w、Bcl-xl的表达量及 Erk信号通路的激活情况。结果显示：在4个抗凋亡基因中，GMDC高表达 A1，Bcl-xl和 Bcl-w这3个基因，提示它们在 GMDC的抗凋亡中起重要作用。而在这3个基因中，只有A1和Bcl-xl随LPS刺激而升高，说明这两个基因协同或者之一是介导LPS提高GMDC存活的分子基础。同时，我们还发现LPS刺激可激活DC中与抗细胞凋亡密切相关的Erk蛋白激酶。这些结果提示LPS可能激活GMDC中MAP/Erk信号通路，上调抗凋亡基因的表达从而产生抗凋亡效应。　　为验证以上假设，我们加入相关特异性抑制剂来抑制因LPS刺激而上调的抗凋亡基因。我们发现，特异性的抑制GMDC中Bcl-xl这一个基因足以完全校正LPS对GMDC存活的影响，因为Bcl-xl基因抑制剂能使LPS诱导的GMDC的存活下调到正常组的水平。而特异性地抑制DC中另一个抗凋亡基因Bcl-2却不能阻碍LPS提高GMDC的抗凋亡效应，说明是Bcl-xl，而非其他抗凋亡基因，特异性地介导了LPS的抗凋亡效应。　　综上所述，我们发现LPS促进GMDC抗凋亡的分子机制主要是由于LPS促进了GMDC抗凋亡基因Bcl-xl的表达。该研究结果对于DC在临床应用上的设计具有重要意义。