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背景:食管癌是一种常见的极具危害性的食管粘膜上皮恶性肿瘤。目前,临床治疗恶性肿瘤的方法是以手术辅以放化疗为主。但恶性肿瘤患者对化疗产生耐药造成多药耐药性(multidrug resistance,MDR)引起死亡是临床上化疗治疗肿瘤亟待解决难题之一。因此,探讨与研发恶性肿瘤MDR的有效逆转剂,提高恶性肿瘤对临床一线化疗药物的敏感性,具有极其重要的意义。迄今,已经发现的部分有MDR逆转作用的化合物大多数由于毒副作用较大,限制了其临床应用。盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochloride,CEH)是千金藤素(cepharanthine,CEP)经半合成成盐所得到的化合物,CEH具有多种生物活性作用。CEH能否逆转食管癌鳞状细胞癌细胞的耐药性且作用机制如何,目前尚未见报道。本实验拟通过建立内外模型考察CEH对肿瘤细胞耐药性的逆转作用,并采用细胞和分子生物学的方法对其逆转肿瘤细胞耐药性的分子机制进行深入探讨。方法:实验选择人食管癌鳞状细胞癌细胞株Eca109及耐顺铂细胞株Eca109-CDDP,釆用MTT分析法,测定CEH单用及与CDDP合用对Eca109、Eca109-CDDP细胞的直接细胞毒作用,并绘制两药联用抑制率-联合指数图;Annexin V/PI双染色法和Western blot检测细胞凋亡及与凋亡相关的蛋白表达与活化;釆用Western blot和RT-PCR法分别检测CEH单用及与CDDP合用后,Eca109-CDDP细胞中P-gp及MDR1 mRNA表达的变化,考察CEH对顺铂耐药的逆转作用;采用Western blot法检测CEH对转录因子c-Jun蛋白的表达和活化的影响。将Eca109-CDDP细胞通过裸鼠腋下接种建立耐药荷瘤动物模型,观察CEH在荷瘤小鼠体内对肿瘤生长的抑制作用。采用免疫组化法检测CEH在体内干预后实体瘤中c-Jun和磷酸化c-Jun蛋白表达水平的变化,采用免疫荧光方法在该模型中研究CEH在体内干预后实体瘤中P-gp蛋白表达水平的变化。结果:1.在1-20.0μM浓度范围内,CEH能够增强CDDP诱导食管癌鳞状细胞癌细胞发生凋亡,下调Bcl-2/Bax的比例,增强CDDP诱导的PARP剪切。2.在上述浓度范围内,CEH对P-gp及MDR1 mRNA的表达的抑制作用逐渐增强。即CEH下调MDR1 mRNA的表达和P-gp蛋白的表达呈浓度依赖性;Bcl-2的表达量逐渐降低而c-Jun、p-c-Jun及JNK的表达量逐渐增加。3.在2.5-10.0mg/kg浓度范围内的CEH联合CDDP的化疗方案对食管癌鳞状细胞癌荷瘤小鼠的肿瘤生长有不同程度的抑制。与CDDP和CEH单药组相比,CDDP联用CEH组的抑瘤作用增强,且抑瘤作用与CEH呈剂量依赖性,10.0 mg/kg CEH联合CDDP化疗方案对肿瘤的抑制作用最强。4.CEH在荷瘤小鼠体内同样可以浓度依赖性的下调P-gp蛋白的表达,增加c-Jun、p-c-Jun及JNK的表达。结论:1.CEH在体内外都能够促进CDDP对食管癌的增殖的抑制作用,并且能够促进CDDP诱导的食管癌鳞状细胞癌细胞发生凋亡。2.CEH逆转Eca109-CDDP细胞的耐药性作用与降低Bcl-2的表达、增强c-Jun的表达和磷酸化有关。CEH可能是通过活化c-Jun/JNK信号转导通路进而调节MDR1mRNA和P-gp的表达,发挥其逆转食管癌鳞状细胞癌顺铂耐药的作用。3.CEH可能是通过抑制P-gp的表达而发挥在耐药性实体型动物肿瘤模型体内逆转肿瘤顺铂耐药的作用。意义:本实验首次阐明CEH可有效逆转Eca109-CDDP细胞的耐药性及其分子机制,为其研究开发并作为肿瘤化疗的耐药逆转剂提供了实验依据。