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目的:观察人晶状体上皮细胞株(Human Lens Epithelial Cells,HLEC)SRA01/04处于急性氧化应激初期时,细胞内衰老标记蛋白30(Senescence Marker Protein 30,SMP30)含量的变化对SRA01/04生理功能的影响,对白内障病因和发展提供进一步的研究。方法:①实验所需最佳H2O2浓度的选择:将处于对数生长期的SRA01/04种入96孔板,使用含不同浓度(150μMOL·L-1、200μMOL·L-1、250μMOL·L-1、300μMOL·L-1、350μMOL·L-1、400μMOL·L-1、450μMOL·L-1)H202的培养基作用2 h,CCK8法选取最佳H2O2浓度建立处于急性氧化应激初期时的细胞模型。②实验所需细胞模型的构建:根据课题组前期研究,使用慢病毒对SRA01/04进行转染建立细胞模型:SMP30过表达(Over Expression,OE)组、SMP30 过表达相应空载(Negative Control Over Expression,NCOE)组、SMP30 沉默(Knock Down,KD)组、SMP30 沉默相应空载(Negative Control Knock Down,NCKD)组。转染成功后运用 q-PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,实时定量聚合酶链反应)确定模型是否成功建立,之后将模型置于含最佳浓度H2O2的培养基中进行培养。③细胞功能的检测:利用细胞计数试剂盒Kit-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)对细胞活力进行检测,5-溴脱氧尿苷(BrdU)对各组细胞的增殖活性进行检测;通过流式细胞仪进行细胞周期分析及评估凋亡;使用SOD测试盒检测细胞抗氧化能力。结果:①通过预实验,确定建立处于急性氧化应激状态细胞模型的最合适的H2O2浓度为300μMOL·L-1。②使用q-PCR技术来确定OE、NCOE、KD、NCKD组SRA01/04细胞系的转染效率,与NCOE组相比,OE组细胞的表达丰度为其的18.378倍,与NCKD组相比,KD组细胞的沉默效率约为94%。③通过CCK-8测定显示,与NCOE组及CON组相比,OE组的细胞活力升高(P<0.05),与NCKD组及CON组相比,KD组的细胞活力降低(p<0.05),Brdu增殖实验示,与CON组(5.618±0.295)及相比,OE组(7.681 ±0.490)增殖能力提高(p<0.01),与 NCOE 组(5.886±0.387)相比,OE 组(7.681 ±0.490)增殖能力提高(p<0.01),与 CON 组(5.618±0.295)相比,KD 组(4.777±0.353)增殖能力降低(p<0.05),与 NCKD 组(5.494±0.067)相比,KD组(4.777±0.353)增殖能力降低(p<0.05),流式细胞仪分析指出处于急性氧化应激下的OE组细胞处于DNA合成后期和细胞分裂期的细胞数量显著增多,同时处于DNA合成前期的细胞减少,KD组细胞处于细胞分裂期的细胞明显减少,同时处于DNA合成前期与DNA合成期的细胞数量无明显变化。通过细胞凋亡测定的结果显示与NCOE组(2.28±0.059)相比,OE组(1.94±0.066)的细胞凋亡率降低(p<0.01);同时,与 NCKD 组(1.86±0.107)相比,KD组(6.28±0.176)细胞凋亡率显著增高(p<0.01)。通过SOD测定试剂盒(WST-1法)检测各组细胞SOD活力值,与NCOE组细胞(10.734±0.651)相比,OE 组细胞(17.523±0.975)SOD 活力值升高(p<0.01),与 CON 组细胞(11.985±0.364)相比,OE 组细胞(17.523±0.975)SOD 活力值升高(p<0.01);与NCKD组细胞(10.781 ±0.060)相比,KD组细胞(8.150±0.506)SOD 活力值下降(p<0.01),与 CON 组细胞(11.985±0.364)相比,KD组细胞(8.150±0.506)SOD活力值下降(p<0.01).结论:建立处于急性氧化应激初期的SRA01/04细胞模型的最佳H2O2浓度与时间为300μMOL·L-1 2h。当SRA01/04处于急性氧化应激初期时,SMP30含量的增加可有效促进细胞的生长活性、增殖能力、抗氧化能力,同时抑制细胞凋亡。增加细胞内SMP30的含量可以抑制或延缓HLEC SRA01/04受氧化应激影响而引起的白内障。