【摘 要】
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柿单宁属缩合单宁,又称原花青素,广泛存在于柿果中,其可溶性能与唾液蛋白结合产生“涩感”。由于“完全甜柿”成熟后在树上即可完成脱涩,不经脱涩处理即可鲜食的特性被广大消费者接受和喜爱,是柿产业发展的重要品种类型和育种目标。作为柿果中的主要次生代谢产物,除结构基因外,柿单宁的转录调控多集中在以MBW（MYB、b HLH和WD40）为主的三元蛋白复合体上,其他类型的转录因子报道甚少。本研究于本课题组前期转
【基金项目】
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国家重点研发计划（2019YFD1000600）；
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柿单宁属缩合单宁,又称原花青素,广泛存在于柿果中,其可溶性能与唾液蛋白结合产生“涩感”。由于“完全甜柿”成熟后在树上即可完成脱涩,不经脱涩处理即可鲜食的特性被广大消费者接受和喜爱,是柿产业发展的重要品种类型和育种目标。作为柿果中的主要次生代谢产物,除结构基因外,柿单宁的转录调控多集中在以MBW（MYB、b HLH和WD40）为主的三元蛋白复合体上,其他类型的转录因子报道甚少。本研究于本课题组前期转录组及蛋白质组测序分析中筛选到的一个差异表达的Zinc finger（锌指蛋白）转录因子Dk ZF6基因为候选对象,利用果实动态表达分析、亚细胞定位、瞬时转化等手段,对Dk ZF6在柿原花青素生物合成中的功能进行了探究,为解析柿原花青素代谢调控网络奠定科学基础。主要结果如下:1.基于RACE实验扩增得到Dk ZF6基因的CDS全长序列为513 bp,编码170个氨基酸,属Q型C2H2型锌指蛋白。其N端和C端分别具有潜在的EAR抑制基序（Lx Lx L）。烟草表皮细胞中Dk ZF6定位于细胞核,该基因在花后10周的柿果实中高量表达,且随果实的发育表达量不断增加,与可溶性单宁积累量呈负相关关系。2.在‘磨盘柿’果实圆片和‘鄂柿1号’叶片中超表达Dk ZF6后,原花青素生物合成相关结构基因Dk CHS、Dk F3’5’H和Dk ANR显著下调,可溶性单宁含量减少;干涉表达Dk ZF6后,原花青素生物合成相关结构基因上调表达,果实圆片和叶片中可溶性单宁含量增加。进一步在拟南芥中异源表达Dk ZF6发现,转基因系T1代种子的DMACA染色结果较野生型果皮颜色浅。3.酵母单杂交实验和双荧光素酶活性分析表明Dk ZF6可与原花青素生物合成结构基因Dk ANR、Dk F3’5’H和Dk CHS启动子相互作用,并抑制其活性。综上所述,Dk ZF6与柿果中可溶性单宁累积呈负相关,其通过抑制合成途径中的结构基因Dk ANR、Dk F3’5’H和DKCHS的活性来降低单宁的含量。本研究为完善了柿原花青素调控网络提供了新的调控途径。
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