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目的:研究表明,绒毛外滋养层细胞(EVT)向母体子宫蜕膜和血管侵袭能力减弱可能是早期自然流产的发病原因之一,印记基因MEST/PEG1对早期胚胎发育起着重要的作用,但其在EVT细胞侵袭过程中的机制作用尚不清楚,本课题旨在研究印记基因MEST/PEG1异常甲基化参与的EVT细胞侵袭过程的调控,该基因的启动子DNA甲基化和表达异常可能为早期自然流产的病因之一。方法:选取2014年4月至2014年5月在重庆医科大学附属第一医院产科选择人工流产的自然受孕早期停育绒毛组织14例及自然受孕早孕绒毛15例,选取孕周为6-10周,自然停育绒毛即B超下显示孕囊内无胚芽及原始心管搏动。分别用蛋白印记法(Western blot,WB)及免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)检测早孕停育绒毛和正常绒毛MEST蛋白表达水平及表达定位;用免疫荧光法(Immunofluorescence,IF)检测MEST在人绒毛外滋养细胞株(HTR8/Svneo)和绒毛膜癌滋养细胞株(JEG-3)中的表达情况;用WB法检测MEST特异性小干扰RNA(Specific small interference RNA,siRNA)处理HTR8/Svneo细胞株后MEST蛋白表达量,及干扰MEST后htr8/svneo细胞中间质型标志分子n-钙粘连蛋白(n-cadherin,n-cad)、波形蛋白(vimentin)和上皮型标志分子e-钙粘连蛋白(e-cadherin,e-cad)及其上游转录因子twist、snail、slug的表达情况。用transwell侵袭和迁移实验、四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyltetrazolium,mtt)显色法、实时xcelli-gence细胞分析系统(rtca)检测处理后htr8/svneo细胞的侵袭、迁移和增殖能力。用早期绒毛外植体培养实验检测干扰mest后对绒毛外滋养细胞外生性生长的影响。用亚硫酸氢盐测序聚合酶链反应(bisulfite-sequencingpolymerasechainreaction,bsp)检测mest在早孕停育绒毛和正常绒毛的甲基化水平。结果:蛋白印记法、免疫组织化学法和免疫荧光法检测结果显示mest/peg1蛋白在早孕正常绒毛及侵袭性细胞株htr-8/svneo、hpt-8中高表达,且主要定位于绒毛evts细胞中,而在细胞滋养层细胞(cytotrophoblasts,ctbs)和jeg-3细胞中表达较低;蛋白印记法检测显示特异性小干扰rna敲低mest表达后htr-8/svneo细胞中mest表达明显降低,证明干扰有效。transwell侵袭和迁移实验结果显示干扰后细胞侵袭和迁移能力显著降低,且实时xcelli-gence细胞分析系统(rtca)结果显示干扰后细胞迁移能力明显下降,而mtt实验显示细胞增殖能力无明显变化。绒毛外植体实验显示敲低mest后外植体绒毛外滋养细胞外生性生长明显降低。蛋白印记法结果显示敲低mest后htr-8细胞中间质型标志分子n-cad、vimentin及其上游转录因子Twist表达均明显降低;Snail、Slug表达均未见明显变化;BSP法检测结果显示MEST在早孕停育绒毛中启动子高甲基化,且与相应的蛋白低表达呈显著相关。结论:早孕期MEST/PEG1异常甲基化可能通过抑制细胞表面蛋白的活性从而抑制滋养细胞的迁移和侵袭能力,进而参与早孕自然流产的发生与发展。