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目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)占全部乳腺癌的10%~20%,是一种独特类型的乳腺肿瘤。指雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、人类表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)均不表达的一类乳腺癌。其复发转移率和死亡率同常规乳腺癌相比更高,预后更差,迄今缺乏有效的治疗手段。β-榄香烯(β-elemene)提取于中药材温郁金,有抗肿瘤作用,并且为活性单体,能够通过抑制肿瘤细胞的迁移、侵袭、阻滞细胞周期、诱导肿瘤细胞的凋亡达到抗肿瘤的效果。但对于其影响蛋白磷酸化则少有研究,因此,为了探究β-榄香烯是否通过影响蛋白磷酸化抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖,我们对MDA-MB-231细胞系进行榄香烯药物功能检测,观测其对三阴性乳腺癌细胞的凋亡、增殖和干性的作用,并且探讨榄香烯对乳腺癌细胞的PI3K/AKT、ERK/P38MAPK、NF-κB等信号转导通路关键蛋白磷酸化水平的调节,探讨榄香烯在三阴性乳腺癌蛋白磷酸化水平方面的作用。方法:(1)MTT法:检测β-榄香烯对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞抑制增殖的影响,并且检测其抑制效率和药物浓度间的相关性。(2)平板细胞克隆形成实验:研究β-榄香烯抑制三阴性乳腺癌细胞生长的作用。(3)流式细胞光度分析术(FCM):检测榄香烯对乳腺癌细胞凋亡的作用。(4)Sphere成球实验:榄香烯对乳腺癌细胞的自我更新能力及功能的影响。(5)蛋白印迹实验:通过进行Western Blot实验,检测榄香烯对三阴性乳腺癌相关的多种信号通路key protein,例如:AKT/P-AKT、PI3K/P-PI3K、ERK/P-ERK、P38/P-P38MAPK、P65/P-P65的调控作用。结果:(1)β-榄香烯对MDA-MB-231细胞的活力、增殖都会显著抑制或减弱,并且随药物浓度的增加,抑制作用增强,根据计算,其IC50值为110.13μg/ml。(2)平板克隆实验中,证实了β-榄香烯能够减少克隆形成,抑制三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的生长。(3)β-榄香烯在一定程度上可诱导MDA-MB-231细胞的凋亡,且随着药物浓度的提升细胞凋亡率也随之上升。(4)通过Sphere成球实验进一步说明榄香烯可抑制MDA-MB-231细胞的成球能力,经药物处理后细胞的成球数目与体积明显下降。(5)三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞相关的几条经典的信号通路,如PI3K/AKT通路、ERK/P38MAPK通路、以及NF-κB信号通路等,在β-榄香烯的作用下均呈现不同程度的抑制,主要表现为对通路关键蛋白AKT、ERK、P38MAPK、P65的磷酸化水平的影响,其活化表达水平降低。结论:β-榄香烯会抑制三阴型乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖;加速细胞的凋亡;抑制细胞的干细胞特性的功能,且这一功能很有可能通过下调肿瘤细胞相关蛋白的磷酸化水平来实现。