蜂胶是由蜜蜂采集植物的嫩芽和分泌物并加入蜂蜡和酶混合加工而成的黏性材料。因其丰富的生物活性被广泛应用于医药、食品、化妆品等行业。蜂胶的生物活性取决于化学成分,而来源不同的蜂胶又因胶源植物、生态环境、生产季节、提取方式等的不同,导致化学成分存在种类和含量的差异。目前蜂胶化学成分大多采用HPLC分析,存在分析耗时长、洗脱溶剂量大、精密度不够高等问题;蜂胶利用中存在醇提取物气味浓烈、易氧化变质、水溶性差、醇提后残渣无二次利用等缺陷,造成了蜂胶的应用范围受限、贮存性能不佳和货架期短等问题。为建立更为快速、高效的蜂胶检测方法,以及改进蜂胶提取物应用性能,本文采用超高压液相色谱(UPLC)分析了不同来源蜂胶水提物(WEP)和树胶水提物(WEG)的化学组成,UPLC-Q-TOF-MS分离鉴定蜂胶醇提物(EEP)和WEP中的未知物;分别采用薄膜超声—动态高压法和乳化/内部凝胶—复凝聚法获得EEP脂质体和EEP微胶囊,并对其进行了表征。具体研究结果如下:(1)使用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(2.1 mm×50 mm×1.8μm),0.1%甲酸-甲醇流动相,洗脱时间20 min,检测波长256和280 nm的UPLC分析方法,同时测定31种WEP、2种WEG、8种EEP和8种蜂胶醇提后残渣再水提物(WEP-R)中的25种酚类化合物含量。通过UPLC分析31种WEP和2种WEG获得的全部色谱信息进行线性判别分析(LDA)。研究结果表明:不同地区WEP所含对照品的种类和含量差异很大,70%以上WEP中存在p-香豆酸、3,4-二甲氧基肉桂酸、肉桂酸、柚皮素、咖啡酸、阿魏酸、生松素、儿茶素、表儿茶素和白杨素等物质;海南WEP的图谱与其它地区图谱相似度最低。WEP-R中仍可鉴定出咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、肉桂酸、柚皮素等多种物质。通过LDA可以将不同颜色和不同地理分区WEP和WEG进行良好区分。(2)UPLC-Q-TOF-MS结果结合已有文献和相关数据库,对31种不同地区蜂胶的EEP和WEP混合物进行分析推断出18种物质,其中包括咖啡酸、生松素、白杨素这3种通过UPLC分析已鉴定出的物质,还有15种物质通过精确分子量和质谱碎片推断其可能的分子式。(3)以大豆卵磷脂和胆固醇为膜材,采用薄膜分散—动态高压技术制备EEP脂质体,通过粒度分析仪、透射电子显微镜、清除DPPH自由基、低温储存试验进行性状表征。研究结果表明,脂质体粒径78±14 nm,包埋率97.80±5.21%,形状为大小均匀球形,EEP稳定性参数为2.53±0.05%,4℃下分别保存3、6个月后包埋率分别下降了16.74%和28.77%,分散系数分别增加了6.61%和14.32%,DPPH自由基清除指数AAI分别为2.78、2.71;HPLC分析贮存180 d后EEP脂质体中7种物质变化分别为1.08%~6.63%,低于EEP的5.55%~19.42%,有效保护EEP生物活性。(4)采用乳化/内部凝胶化-复凝聚技术制备载EEP的海藻酸钠-壳聚糖微胶囊,利用粒度分析仪、激光共聚焦显微镜、红外光谱仪和X射线衍射仪分析、体外释放实验、加速实验表征微胶囊性状。研究结果表明,微胶囊粒径大小为265±25nm,包埋率和载药率达到72.80±3.8%和19.96±2.4%,形状为大小均匀球体;红外光谱和X射线衍射分析结果表明海藻酸钠和壳聚糖反应形成微胶囊;模拟胃液和肠液条件下体外释放8 h释放率46.60±0.80%,HPLC分析加速实验EEP脂质体中7种物质含量变化为14.01%~39.68%,低于EEP中37.01%~77.45%。制得的微胶囊粒径小、稳定性良好、释放率符合肠溶体系要求、对EEP内活性物质起保护作用。综上所述,UPLC可以快速分析蜂胶化学组成,采用醇提和水提结合的方式可以充分利用蜂胶有效成分,LC-MS分析EEP和WEP混合物可以更全面了解蜂胶化学成分,为蜂胶的进一步开发利用提供基础数据;EEP脂质体和微胶囊的制备,解决了蜂胶贮存不稳定性的难题,可以作为新型载药系统用于控制和持续释放药物;它有效封装有效成分并实现缓释,可以更广泛地应用于化妆品、农业生产、食品技术和纺织品行业。本文研究结果为:UPLC和UPLC-Q-TOF-MS可快速分析鉴定蜂胶化学成分,本研究制得EEP脂质体和微胶囊具备应用于药物、化妆品行业的可能性。