论文部分内容阅读
目的:观察脑缺血后大鼠海马不同脑区脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和多种mRNA转录本的表达,为后续研究其组蛋白乙酰化修饰变化奠定基础,开辟一条治疗脑损伤的新途径。方法:Wistar雄性大鼠,体重180-250g,随机分为对照组、假手术组和缺血模型组(6h、24h、48h三个组),每组分笼饲养,每笼放2只,饲养于12 h昼夜循环的安静环境中,自由摄食饮水,术前适应新环境1周。大鼠术前禁食过夜,用水合氯醛麻醉(40 mg/100 g,i.p.)后将大鼠固定于操作台上。先沿第一颈椎内斜向上的神经来寻找翼突孔,用尖端细长的电烙铁电凝双侧翼小孔下方的椎动脉,缝合皮肤。然后颈部正中切口,分离双侧颈总动脉,穿线并缝合皮肤,夜间禁食。次日,用微创动脉夹夹闭清醒大鼠的双侧颈总动脉15 min,造成短暂前脑缺血。假手术组中除不电凝椎动脉和不夹闭颈总动脉外,其他操作与缺血模型组相同。对照组不做任何处理。模型制作成功后,从五个组随机抽取大鼠断头取脑并把海马区分为CA1、CA3区,进行Western Blot和qPCR实验,对BDNF蛋白及BDNF mRNA定量。其余的大鼠养7d后灌注切片进行尼氏染色实验,显微镜下观察海马CA1、CA3区锥体神经元的变化。结果:1.尼氏染色结果显示:对照组和假手术组两组大鼠的海马CA1区神经元结构正常,细胞核圆而规则。缺血模型组大鼠海马CA1区正常神经元数量显著减少,大量锥体神经元变性坏死,细胞核不规则并固缩深染,细胞间隙明显增大。2.qPCR结果显示:缺血后CA3区6h组BDNF m RNA I,BDNF mRNA IV表达量分别与假手术组的表达量相比显著增加(n=3,P<0.05),BDNF mRNA VIII明显增加(n=3,P<0.01),缺血后CA3区48h组BDNF mRNA IIb明显增加(n=3,P<0.05),缺血后CA1区6h组BDNF mRNA VI表达量明显增加(n=3,P<0.05),BDNF mRNA IIa、BDNF mRNA IIc、BDNF mRNA III、BDNF mRNA V、BDNF mRNA VII、BDNF mRNA IX无明显变化。3.Western Blot结果显示:模型组大鼠CA1区之间BDNF蛋白表达无统计学差异;模型组与假手术组和正常组相比,大鼠海马CA1区BDNF蛋白表达水平显著降低,有统计学意义(P<0.05,n=3);模型组海马CA3区与假手术组、正常组CA3区相比,BDNF蛋白表达无统计学差异。结论:1.用改良的Pulsinelli四血管夹闭法能成功建立大鼠脑缺血模型。2.模型组大鼠海马CA1区和CA3区具有不同的BDNF mRNA转录本改变。3.BDNF蛋白表达量与不同的BDNF mRNA转录本改变有关。