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羊传染性脓疱病或称羊口疮病,传染性强,目前全国各养羊地区都有流行,严重影响了成年羊的生产性能和羔羊的生长发育,给养殖户造成了很大的经济损失。目前,关于本病的流行病学资料还较少,也少见羊口疮灭活疫苗的免疫效果评估研究,且还没有特异性的药物用于有效治疗该疾病。本研究对陕西省富平某奶山羊养殖场的羊口疮进行了分子病原学调查,并以本实验室成功分离出的ORFV毒株(FX0910株)制备羊口疮病毒灭活疫苗,并进行安全试验和免疫效果评估。本研究的主要内容、结果及结论如下:1、富平关中奶山羊第一养殖小区羊口疮分子病原学调查采集表观健康奶山羊的血样和绵拭子,应用NaI法提取血样中病毒DNA、GuSCN法提取绵拭子中病毒DNA,采用本实验室建立的检测羊口疮病原的PCR方法,检测样品中的羊口疮病原。结果显示,不同养殖圈舍的病原检出率不同,且带毒羊有的为血样阳性,有的为绵拭子阳性,有的为血样和棉拭子双阳性;该养殖场羊口疮病原检出率为66.36%,其中血样阳性检出率为58.49%,绵拭子阳性检出率为23.64%,血样和棉拭子双阳性检出率为13.64%。2、羊口疮病毒灭活疫苗的制备及免疫效果评估以本实验室保存的ORFV强毒株(FX0910株)作为病毒材料,利用犊牛睾丸原代细胞进行病毒扩增,应用Reed-Muench法测定病毒感染力,用终浓度为0.4%甲醛灭活羊口疮病毒液48h,在犊牛睾丸原代细胞和羔羊口唇部做病毒灭活效果检测;灭活的病毒与铝胶盐或转移因子混匀,制备羊口疮病毒灭活疫苗;在羔羊腹股沟皮下注射10倍剂量的灭活疫苗,检测灭活疫苗的安全性;灭活疫苗免疫青年怀孕奶山羊,颈部皮下注射免疫,连续免疫三次,每次间隔14天,铝胶盐羊口疮病毒灭活疫苗免疫剂量为1ml/头,转移因子佐剂羊口疮病毒灭活疫苗免疫剂量为2ml/头。每次免疫前、后采集血样、绵拭子和血清。PCR检测方法对抗凝血和绵拭子进行病原检测,固定病毒-稀释血清法测定血清中和抗体效价,统计1月龄以内新生羔羊的羊口疮发病率。结果显示:(1)在犊牛睾丸原代细胞上增殖了羊口疮病毒,病毒TCID50为108.46TCID50/mL;(2)经细胞和动物检测,甲醛灭活的病毒不能引起细胞病变,也不能引起羔羊发病,说明病毒彻底丧失了感染力;(3)将制备的羊口疮病毒灭活疫苗接种羔羊腹股沟后,羔羊体况良好,说明灭活疫苗的安全性良好;(4)免疫铝胶盐佐剂灭活疫苗和转移因子灭活疫苗前病原检出率分别为75%和50%,免疫一次后病原检出率分别降低至40%和16.67%,免疫两次后病原检出率均降低为0;免疫以铝胶盐、转移因子为佐剂制备的灭活疫苗前孕羊体内中和抗体效价分别为1:2和1:20.49,免疫三次后,孕羊体内中和抗体水平均明显升高,中和抗体效价分别达到1:24.5和1:24.75;免疫灭活疫苗组1月龄内羔羊羊口疮发病率为20%,而未免疫组1月龄内羔羊发病率为35.48%。结论:1.摸清了所调查羊场110只奶山羊的羊口疮带毒情况;2.制备出了羊口疮病毒灭活疫苗,试验表明灭活疫苗安全可靠;3.两种不同佐剂制备的羊口疮病毒灭活疫苗免疫怀孕青年奶山羊,能够显著提高孕羊体内的中和抗体水平,并显著降低了羊口疮病原检出率,具有一定的清除病原,治疗羊口疮病的作用。4.羊口疮病毒灭活疫苗免疫孕羊,对新生羔羊有很好的免疫保护效果。