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研究背景和目的:宫颈癌是严重威胁妇女健康的疾病之一。目前,宫颈癌的主要治疗方法包括手术、放疗及化疗,其中,根治性手术不适用于有生育需求的年轻患者,宫颈锥切术可能会增加早产、胎膜早破等不良妊娠结局的发生风险;而放化疗具有副作用大、非靶向性、多药耐药性等局限性。近年来,关于纳米技术在癌症的诊断和治疗领域的研究快速发展。在宫颈癌治疗方面,通过构建纳米载药体系,可有效减少副作用,改善治疗效果。滚环扩增（Rolling circle amplification,RCA）因其操作简单、放大效率高等优点,现已发展成为纳米生物医学领域的一项重要技术,可用于构建多种功能性DNA纳米结构,实现生物检测、生物成像、药物递送等。本研究旨在基于RCA技术构建具有He La细胞靶向性的DNA纳米载药体系（Dox-DNFs）,与牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）修饰的金纳米粒子（Gold nanoparticles,Au NPs）（BSA-Au NPs）相结合,分别通过主动靶向和被动靶向进入He La细胞,并在溶酶体酸性条件下发生聚集,基于质子海绵效应导致溶酶体溶胀,从而实现靶向化疗/光热联合治疗,通过体内、体外实验研究该体系对宫颈癌细胞的杀伤作用。方法:（1）本研究基于RCA技术构建DNA纳米花型结构（DNA nanoflowers,DNFs）,用于负载并靶向递送抗肿瘤药物阿霉素（Doxorubicin,Dox）。通过将He La细胞核酸适体的互补序列和载药位点设计到环状模板中,基于RCA反应制备长单链DNA（Single-stranded DNA,ss DNA）,进而自组装得到对He La细胞具有靶向识别能力的DNFs,并将所制备的DNFs作为药物载体用于负载Dox。对DNFs和载药DNFs（Dox-DNFs）的尺寸、形貌、表面电荷等进行表征,并探究药物负载和释放能力。（2）采用柠檬酸钠还原法合成Au NPs,通过BSA修饰,制备电荷可反转的金纳米粒子（BSA-Au）,对其粒径、形貌及不同p H下的表面电荷等进行表征。研究不同p H下BSA-Au和DNFs的相互作用,并对体外光热效应进行初步研究。（3）将基于RCA构建的Dox-DNFs与BSA-Au相结合,采用共聚焦显微镜、细胞透射电镜等对Dox-DNFs@BSA-Au的主动、被动靶向识别能力进行表征。利用CCK-8实验、流式细胞术、活/死细胞染色实验等探究Dox-DNFs@BSA-Au对He La细胞的毒性作用。在小鼠体内建立He La细胞异体移植肿瘤模型,研究所构建的多功能核酸组装体在活体中的化疗/光热联合治疗效果。结果:（1）基于RCA反应制备得到具有褶皱、多孔结构的DNFs,粒径约为200 nm。该材料实现了抗肿瘤药物Dox的有效负载,负载效率高达71.67%。且Dox-DNFs具有良好的稳定性,可在生理条件下稳定封装Dox,并在酸性p H下实现Dox的可控释放,16 h内释放量可达78.69%。（2）制备得到BSA-Au球形纳米粒子,粒径约为25 nm,且具有良好的单分散性。实验测得所用BSA的等电点约为5.5。Zeta电位结果表明,当p H＜5.5时,BSA-Au带正电;当p H＞5.5时,BSA-Au带负电,因此BSA-Au具有电荷可反转的性质。当p H＜5.5时,带正电荷的BSA-Au可通过静电作用聚集在DNFs上。紫外-可见吸收光谱和Zeta电位结果表明,此时BSA-Au可在DNFs上发生聚集。体外光热实验结果表明,BSA-Au与DNFs相互作用后温度升高至46.1 oC,且光热性能稳定。（3）共聚焦显微镜成像结果表明,Dox-DNFs对He La细胞具有主动靶向识别能力,细胞透射电镜图显示BSA-Au可通过EPR（Enhanced penetration and retention）效应被动靶向进入He La细胞。细胞实验表明,所构建的Dox-DNFs@BSA-Au纳米组装体系可有效诱导He La细胞凋亡,CCK-8实验显示该体系处理后He La细胞的活性为43.26%,流式细胞实验表明该体系的细胞凋亡率为40.03%。进一步,将Dox-DNFs@BSA-Au用于小鼠异体移植宫颈癌模型的治疗,对小鼠体内肿瘤表现出明显的抑制作用,且治疗效果比单一化疗或光热治疗效果显著。此外,治疗过程中小鼠各主要脏器组织切片并未观察到明显损伤,表明Dox-DNFs@BSA-Au具有良好的生物安全性。结论:（1）基于等温扩增RCA技术DNA自组装得到含有He La细胞核酸适体的DNA纳米花型结构（DNFs）,用于高效负载化疗药物Dox。（2）制备了具有电荷可反转性质的BSA-Au,可通过静电吸附在DNFs上,在808 nm激光照射下发挥光热效应。（3）将用于药物靶向递送的Dox-DNFs与用于光热消融的BSA-Au相结合,构建多功能核酸组装体系（Dox-DNFs@BSA-Au）,实现了对He La细胞的联合杀伤作用,显著抑制小鼠体内移植瘤的生长。