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传统中草药对活性氧(ROS)具有双向调节作用,即既可直接清除ROS,使机体减轻遭受过氧化损伤;又可通过提高免疫细胞的ROS产生能力,提高机体对病原微生物等的清除能力。由于中药的成分比较复杂,因此多年以来人们都在采用现代先进的分离技术和手段对中药所含的具有生物活性的单体化合物进行提取分离。本论文对三种天然产物七叶一枝花、芦荟、细梗胡枝子的有效成分进行了提取分离。然后通过核磁共振(1D,2D-NMR,Hsoc,HMBC,1H-1H COSY和1D-TOCSY)、红外、紫外、质谱、X-射线单晶衍射等波谱技术对分离得到的天然化合物进行逐-化学结构鉴定。进而通过对比分子结构,分析了多种天然化合物在抗氧化、免疫调节等相关自由基的药理方面的构效关系,获得如下主要研究结果:
1.七叶一枝花甾体皂苷以及免疫活性药理研究
采用溶剂法及正相硅胶、大孔吸附树脂、葡聚糖(Sephadex LH-20)、反相柱层析和制备TLC分离等色谱技术对重楼属植物七叶一枝花进行提取分离,从中共分离得到了4个甾体皂苷类化合物,经波谱分析和化学方法确定它们分别为:25R-薯蓣皂苷元-a-L-鼠李吡喃糖基-(1→2)-a-L-阿拉伯呋喃糖基-(1→4)-β-D-葡萄吡喃糖苷、25R-薯蓣皂苷元-a-L-鼠李吡喃糖基-(1→4)-a-L-鼠李吡喃糖基-(1→4)-[a-L-鼠李吡喃糖基-(1→2)]-β-D-葡萄吡喃糖苷、25R-偏诺皂苷元-a-L-鼠李吡喃糖基-(1→2)-a-L-阿拉伯呋喃糖基-(1→)-β-D-葡萄吡喃糖苷和薯蓣皂苷元。在此基础上,首次采用X射线单晶衍射技术对薯蓣皂苷元晶体进行了结构解析。
针对皂苷对免疫系统具有调节作用,研究了三种薯蓣皂苷对小鼠样巨噬细胞RAW264.7的相关吞噬作用、呼吸爆发和一氧化氮的产生等基本免疫性质的影响。实验结果表明:三种薯蓣皂苷都对巨噬细胞吞噬功能具有不同程度的激活作用;对比而言,唯有带糖残基功能基团的薯蓣皂苷可导致细胞氧呼吸爆发过程中产生的超氧阴离子和一氧化氮浓度显著增强。
2.芦荟双氢香豆素类化合物的抗氧化能力和免疫活性
从中药芦荟中分离得到的两个结构新颖双氢香豆素类化合物的抗氧化和免疫刺激两方面的生物活性进行了研究。采用ESR波谱仪测定它们对O2-·和·OH两种自由基的清除能力,这两个化合物都具有相似的清除自由基的能力,并采用B3LYP/6-31G(P)/AM1/AM1方法,计算O-H BDEs,从理论上分析了它们的抗氧化的活性中心。同时,对小鼠腹腔巨噬细胞的呼吸爆发和吞噬作用的影响进行了研究。结果表明只有闭环的芦荟双氢香豆素能够刺激巨噬细胞产生呼吸爆发,增强其吞噬活力。对比之下,另一个开环的双氢香豆酸乙酯对巨噬细胞没有明显作用,由此可见,闭环的芦荟双氢香豆素通过既直接清除ROS,又刺激巨噬细胞ROS的产生双方面的功能,对于免疫系统的自由基平衡具有一种双向调节功能,这将有助于减缓在免疫激活过程中产生的过量的ROS造成的应激损伤。
3.细梗胡枝子化学成分以及黄酮锰络合物类SOD活性分析
采用溶剂法及正相硅胶、聚酰胺、葡聚糖(Sephadex LH-20)柱层析和制备TLC分离等色谱技术对豆科植物细梗胡枝子全草进行提取分离,目前正在分离正丁醇段,现已分离得到了5个黄酮苷类化合物,综合运用了各种核磁共振技术(1D、2D-NMR)、Hsoc、HMBC、1H-1H-COSY和化学方法确定它们的结构分别为:山奈酚-3,7-2-(-O-α-L鼠李糖)、槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖、山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖,其中槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖和槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖在胡枝子属植物属首次获得。
通过合成了以槲皮素为代表的黄酮醇和Mn(II)形成的金属络合物,测验了其歧化超氧阴离子的SOD活性,初步的实验结果表明,槲皮素锰络合物具有一定的SOD活性。这将为黄酮锰络合物的SOD酶活性的研究提供初步的实验基础。