凝结芽孢杆菌分离筛选及复合益生菌剂的应用研究

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采用改良MRS培养基,从土壤中分离一株能抑制常见病原菌的产酸芽孢杆菌。该菌株对大肠杆菌(Escherichia coli O139,E.coli K88,E.coli K99),伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium O4Hi,ST O4Hi),金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等均有较强的抑制作用,经生理生化实验和16S rDNA序列分析鉴定为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。该菌株经模拟胃液处理30 min后存活率为91%,耐胆盐浓度达3.0%,小鼠急性毒性实验结论为无毒无害物质,此菌株安全可靠。研究结果表明该菌株可以顺利通过胃酸进入小肠后开始作用,改善肠道微生态环境,具有作为微生态制剂菌株的应用潜力。对此株凝结芽孢杆菌培养条件进行优化,以摇瓶发酵的方法,采用Plcakett-Burman设计法从9种原料中筛选出2种对凝结芽孢杆菌菌数有显著影响的因素,即葡萄糖和碳酸钙。然后针对葡萄糖、碳酸钙、胰蛋白胨这三个因素进行最陡爬坡试验及中心组合设计优化最佳培养基。优化后培养基为葡萄糖16 g/L、氯化钠4 g/L、酵母粉6 g/L、胰蛋白胨20 g/L、牛肉膏6 g/L、磷酸二氢钾2 g/L、硫酸镁1 g/L、硫酸锰0.25 g/L、碳酸钙3 g/L,菌数可达2.1×10~9 cfu/mL。将实验室两种益生菌剂A、益生菌剂B替代抗生素复合使用于仔猪饲料中,菌剂A、菌剂B按2:3的比例添加于配合饲料中。选取二元杂(长×大)及三元杂(杜×长×大)仔猪,进行了两轮饲养实验。通过平均增重、料肉比、腹泻率等指标探讨混合菌剂的作用效果。结果表明:断奶后21-35日龄,配合饲料中益生菌剂添加量0.02%,35-50日龄配合饲料中益生菌剂添加量0.1%,效果最好,与抗生素组相比,小猪增重没有显著差异,但显著提高饲料转化率,腹泻率降低51.7%。
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