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研究背景和意义高血压被认为是心血管疾病如中风、心脏病、心力衰竭等疾病的主要危险因素。高血压血管的主要病理改变是血管重构。而血管平滑肌细胞(VSMC)是构成血管壁的主体,由于其高度的可塑性和表型转换的能力,使得其在高血压血管重建的病理变化中起着至关重要的作用。胞红蛋白(cytoglobin/CYGB)是珠蛋白家族中的新成员,近年来关于CYGB的文献报道有很多。但CYGB对血管平滑肌作用的研究甚少,仅有研究发现CYGB在血管去分化的过程中表达降低,而且抑制CYGB的表达可减少血管新生内膜的形成,其原因是促进了 Caspase-3的表达从而促进了 VSMC凋亡。但是CYGB对VSMC增殖迁移的影响尚未见报道,因此本课题对此进行了初步研究,通过检测CYGB在高血压主动脉中的表达情况,以发现CYGB与高血压之间的联系,并构建CYGB过表达和干扰细胞株,以探索CYGB表达增高和降低时对VSMC增殖迁移的影响。研究方法1.建立高血压大鼠模型并设立对照组,通过RT-PCR以及Western Blot检测CYGB的表达变化;采用RT-PCR检测给予细胞血管紧张素Ⅱ及15%牵拉刺激后CYGB的表达变化。2.构建CYGB过表达稳转株,用Western Blot检测CYGB过表达之后对增殖、迁移、细胞表型、细胞外基质、细胞凋亡相关基因的蛋白表达影响,划痕实验、流式和EdU检测检测CYGB过表达之后对增殖迁移的影响3.转染siCYGB和构建shCYGB稳转株。RT-PCR筛选出最佳干扰片段且检测转染siCYGB后金属蛋白酶,细胞表型和细胞外基质的表达变化;Western Blot检测shCYGB稳转株中MMP9,细胞表型,细胞外基质以及细胞凋亡相关蛋白的表达影响。4.Western Blot检测shTET1和shTET2稳转株中CYGB的变化。研究结果与对照组相比,术后四周高血压大鼠主动脉中CYGB的表达明显降低;15%牵拉张应变组与5%牵拉张应变组相比,CYGB的RNA表达含量明显降低;血管紧张素Ⅱ刺激组与对照组相比,CYGB的RNA表达含量明显降低;通过病毒转染有效地使CYGB在VSMC中过表达和沉默;Western Blot显示CYGB过表达促进了MMP9、增殖相关基因和calponin的表达,降低了Col Ia的表达,而对细胞凋亡相关蛋白没有影响;细胞划痕实验和流式实验显示CYGB过表达促进了VSMC迁移增殖;转染siCYGB之后,RT-PCR结果显示MMP9,Col1a和Col Ⅲa表达均降低;然而在shCYGB稳转株中电泳结果显示细胞增殖迁移、表型分子和凋亡相关蛋白,细胞外基质均无变化;Western Blot显示在shTET1和shTET2稳转株中CYGB表达无变化。研究结论CYGB在高血压中表达降低,过表达CYGB促进了 VSMC的增殖迁移能力,并且降低了 Col Ia的表达,说明CYGB在高血压血管重建中起到一定的作用。