海洋细菌G0018B的次级代谢产物分离、纯化及结构鉴定

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:candyyao007
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近几十年来,随着陆地上的天然产物的大量开发,资源在不断减少,而海洋中蕴藏着数量庞大且有趣的天然产物,其中,一些海洋天然产品或其衍生物已经进入临床或临床试验阶段。随着生物信息学、遗传学和生物化学的迅速发展,许多海洋天然产物的生物合成途径以及相应的酶学也在大量地被研究。DNA测序技术以及分析技术的逐步发展和应用使得以基因组学为指导的新型海洋天然产物分离和纯化已经成为新药特药研发的主要平台之一。本文对一种新型海洋细菌G0018B从形态学和分子生物学两方面进行菌种鉴定,发现具有以下特征:1)在琼脂培养基上生长至48 h时为黄色透明光滑菌落;高倍显微镜下单个菌株呈杆状。2)菌株16S rDNA的保守核酸序列比对分析结果表明G0018B菌株与厦门海源菌10-D-4(Idiomarina xiamenensis strain 10-D-4)具有最高的同源性,且系统发育进化树也证明了其亲缘关系。利用生物信息学分析平台对其基因组功能预测和分析发现此菌株具有一个编码thiopeptide的功能基因簇和其他几个未知的基因簇,预示着此菌株可能产生一种新的硫肽类抗生素。对鉴定的菌株进行大规模发酵培养,经由抗菌活性试验指导,利用高效液相(HPLC)、ODS(C18)反相柱和SephadexLH-20分子筛等不同的色谱法进行分离纯化,共得到7种纯化合物;通过高分辨MS并结合一维、二维核磁共振(NMR)图谱鉴定出化学结构,分别为:化合物 1:Butyl isobutyl phthalate;化合物 2:Dibutyl phthalate;化合物 4:Cyclo-(4-hydroxy-prolyl-phenylalanine),其空间结构暂不确定;化合物 5:Cyclo-(4-hydroxy-prolyl-phenylalanine),根据核磁数据确定其为化合物4的空间异构体;化合物6:2-Methyl-N-(2’-phenylethyl)-butyramide;化合物 3 的提取量过少暂无法完成结构的鉴定;化合物7:初步判断其结构可能含有多个环,呈黄色粉末状。活性试验检测发现化合物2对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具有抑制活性,以氨苄青霉素为阳性对照,在浓度为25 μg/mL时,对金黄色葡萄球菌的抑制率为47.0%,对枯草芽孢杆菌的抑制率约为50.0%。我们初步了解了菌株G0018B的次级代谢产物的概况,为之后继续分离纯化得到基因组预测的硫肽类抗生素,以应对日益严重的细菌耐药性这一世界性难题。
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