表观遗传途径对AtPOE1家族基因表达的调控研究

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhaojianan1987
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含有Pollen Ole e1结构域的蛋白最初被认为是一种花粉过敏原。近期的研究表明,此类蛋白作为发育调控因子在一些植物的不同组织中起着作用,但在拟南芥中,对含此结构域的蛋白还未有过系统性的研究。在本研究中,我们利用生物信息学、分子生物学、细胞学和染色质免疫沉淀等方法和技术对拟南芥中Pollen Ole e1家族(AtPOE1)成员的组成、表达模式、AtPOEl;26基因功能及其与表观调控的关系进行了较为系统的研究,获得了如下结果:1、通过搜索TAIR (http://www.arabidopsis.org/)的数据库分析发现:在拟南芥的基因组中有28个基因编码Pollen Ole e1结构域蛋白。我们对这些基因进行生物信息学分析后,分类编入AtPOE1家族,分别命名为AtPOE1;1至28。2、通过分别对14天和30天野生型植株的不同组织进行了反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)实验分析AtPOE1家族基因的转录概况,发现大部分的AtPOE1家族基因表现出特异性的转录谱。3、构建了pAtPOEl;26:GUS载体,并且转化拟南芥,获得了共20株转化苗,对T2代转化苗进行GUS染色后,发现AtPOE1;26蛋白只在根中表达。4、构建了35S:YFP-AtPOE1;26载体,转烟草表皮细胞观察了AtPOE1;26蛋白的亚细胞定位,发现在细胞质和细胞核中都有黄色荧光蛋白(YFP)信号的出现。5、通过定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)对比PRC2突变体clf-50和野生型中AtPOE1;26转录水平的高低。发现,无论是在14天幼苗的莲座叶中还是在完整的十四天的苗中AtPOE1;26的表达水平对比野生型都有很大程度的上升。6、Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)实验分析对比了野生型和clf-50中AtPOE1;26基因位点上组蛋白H3第27位赖氨酸3甲基化(H3K27me3)的水平,结果显示:相对于野生型,H3K27me3的水平在突变体中有了显著的下降。
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