目的　　 探讨基质金属蛋白酶-2在声门上型喉癌中的表达及其与淋巴结转移的关系。　　 方法　　 临床病例资料收集:收集中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉头颈外科2011年3月至2011年12月手术切除的声门上型喉癌组织50例(经病理证实均为鳞状细胞癌)。其中男性42例,女性8例;60岁以下患者24例,60岁以上(含60岁)患者26例;病理组织学分级(WHO1997),高分化34例,中低分化16例;临床分期(UICC2002),Ⅰ-Ⅱ期23例,Ⅲ-Ⅳ期27例;T分期(T1+T2)28例,(T3+T4)22例;有淋巴结转移23例,无淋巴结转移27例(术后淋巴结标本采用透明淋巴结摘出连续切片法确定有无淋巴结转移)。取癌旁组织(肿瘤远端1cm以上经病理证实未发现癌细胞)15例。常规制蜡块,4μm连续切片,备免疫组织化学实验用。另取15例新鲜原发声门上型喉癌组织及其配对癌旁组织(肿瘤远端1cm以上经病理证实未发现癌细胞),术中切除后立即放入-70℃冰箱保存,备蛋白免疫印迹实验用。所有患者均为原发,术前均未接受过放化疗。本实验经中国医科大学伦理委员会审查,患者每次手术前均签署知情同意书,符合相关伦理标准。　　 免疫组织化学染色及结果判定:采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(Streptavidin-peroxidase,S-P法)检测声门上型喉癌及癌旁组织中MMP-2的表达及淋巴管密度值,用PBS代替一抗做阴性对照。结果判定:MMP-2染色主要定位在细胞浆内棕黄或棕褐色颗粒,染色强度高于背景非特异性颜色为阳性细胞,先于低倍镜下选择阳性细胞最密集的5个视野,再用高倍镜在每个视野观察100个细胞,最后取5个视野中阳性细胞的平均百分数做为每张切片的结果,按照以下标准进行评分:阳性细胞小于10%为(-),阳性细胞在10%-25%为(+),阳性细胞数在25%-50%之间为(++),阳性细胞大于50%为(+++)。D2-40标记阳性的淋巴管为棕黄色管腔样结构,先在低倍镜下选择淋巴管最丰富区域,即“热区”,再在高倍镜下计数5个视野淋巴管数,取其平均值作为该切片LMVD值。　　 蛋白免疫印迹与结果判定:收集组织(包括声门上型喉癌组织及其配对癌旁组织),匀浆,离心,Bradford法测定蛋白质浓度。SDS-PAGE电泳,一抗4℃孵育过夜,与相应二抗室温下孵育2小时,ECL发光。结果判定:对显影结果进行扫描,每次检测时都检测β-actin,以各组MMP-2与β-actin灰度值的比例作为各组组织中MMP-2蛋白的相对含量,进行统计学分析。　　 结果　　 MMP-2在声门上型喉癌组织中的阳性表达率为78.0%,明显高于癌旁组织的13-3%(P＜0.05);声门上型喉癌组织中MMP-2表达的高低与淋巴结转移、临床分期密有相关性(P＜0.05),而与T分期、性别、年龄及肿瘤的分化程度无明显的相关性(P＞0.05);蛋白免疫印迹示MMP-2在声门上型喉癌中表达高于癌旁正常组织。LMVD在声门上型喉癌组和癌旁对照组计数分别为12.32±2.22和5.63±1.67,在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组计数分别为13.26±1.89和1.51±1.18(P＜0.05);MMP-2与LMVD呈正相关(rs=0.723.P＜0.01)。　　 结论　　 声门上型喉癌组织中MMP-2蛋白的阳性表达率高于癌旁组织,有淋巴结转移组MMP-2蛋白表达高于无淋巴结转移组,提示MMP-2蛋白表达可能与声门上型喉癌的淋巴结转移密切相关。MMP-2蛋白表达与LMVD值呈正相关,提示MMP-2可能促进了脉管系统的新生,特别是淋巴管的新生。MMP-2可能是促进声门上型喉癌淋巴结转移的重要的生物标志。但其具体的分子机制还需要进一步研究。