重组人白细胞介素-11工程菌的发酵条件研究

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为了探讨发酵条件对大肠杆菌表达人白细胞介素-11融合蛋白的影响,利用正交实验设计,对影响工程菌的生长及重组人白细胞介素11融合蛋白的表达因素如培养基中的葡萄糖浓度、蛋白胨浓度、酵母提取物浓度、无机盐浓度、pH及摇床转速、装液量、接种量等在摇瓶中进行了初步的研究。确定了工程菌生长及表达的培养基和培养条件:葡萄糖lOg/L,蛋白胨20g/L,酵母提取物lOg/L,NaC110.0 g/L,KH<,2>PO<,4> 6.0 g/L,K<,2>HPO<,4>3.5 g/L,MgSO<,4>3.5g/L,pH7.5,接种量10%,装液量10%,摇床转速220r/min及IPTG浓度0.8 mmol/L,诱导时间为4h-5h。研究了乙酸对重组菌生长及外源基因蛋白表达的影响;同时对重组菌培养过程中乙酸生成机制进行研究,得出供氧不足及过量的葡萄糖是导致重组菌代谢产生乙酸的两个极为重要的因素。结果表明,乙酸的存在不仅导致重组菌生长速率的降低及延迟的增长,而且对外源基因产物的表达具有强烈的抑制作用。这为工程菌的高密度培养及外源基因的高表达打下了基础。在此基础上,并在NBS BiofloⅢ-5L发酵罐中研究了重组菌的分批培养、重组菌的不控制溶氧的补料培养、重组菌的“平衡DO-stat”法补料培养,最后采用“平衡DO-stat”法调控补糖速率,抑制了培养过程中的乙酸生成,实现了重组菌的高密度培养表达,培养表达生物量达到55g/L(DCW),重组人IL-11融合蛋白表达量达到33%左右。并考察了重组菌在高密度培养过程中质粒的稳定性,结果质粒没有发生丢失现象,质粒依然表现出良好的稳定性。为进行中试研究打下基础。
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