大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷抑制黑色素瘤转移的机制研究

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目的:研究大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷(中草药羊蹄的主要成分)对皮肤黑色素瘤转移的作用及其机制。方法:将人皮肤黑色素瘤A375细胞用不同浓度的大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷处理后,A375细胞的细胞活性通过CCK-8法进行检测;以划痕法检测A375细胞的迁移能力;以transwell法检测A375细胞的侵袭能力;RT-PCR及western-blot分别检测COX-2的m RNA转录及蛋白表达;ELISA法测定c-jun的活性;western-blot测定c-jun的磷酸化;分别以COX-2 si RNA和过表达质粒对COX-2进行沉默和过表达,以c-jun抑制剂SP60012和过表达质粒对c-jun进行抑制和过表达,检测COX-2和c-jun在黑色素瘤迁移和侵袭中的作用。结果:大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷有效降低了A375细胞的活性,并对A375细胞的迁移和侵袭均有抑制作用;大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷能够通过抑制m RNA转录水平以及COX-2的蛋白表达,从而抑制A375细胞的迁移侵袭;COX-2的过表达能够明显促进A375细胞的侵袭和迁移;而沉默COX-2能够显著抑制A375细胞的迁移侵袭。COX-2的上游因子AP-1由c-jun和c-fos组成,在A375细胞中大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷作用下c-jun的活性和磷酸化均有明显的降低,而c-fos的活性无变化;抑制c-jun可以使A375细胞COX-2蛋白表达和m RNA转录降低,而过表达c-jun可以明显促进A375细胞迁移侵袭。结论:大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷通过降低c-jun磷酸化,下调COX-2的表达以及抑制AP-1活性,抑制A375细胞的侵袭和迁移作用。
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