酒精对兔骨髓间充质干细胞成骨分化的影响研究

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wudajiang1213
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目的:对兔股骨头髓内间充质干细胞进行分离,分析观察充质干细胞(BMSCs)在体外培养状态下的生长情况,对两种成骨细胞诱导分化方法及分化能力进行对比,并研究观察酒精对体外培养成骨细胞凋亡的影响。   方法:运用密度梯度离心法获取兔骨髓间充质干细胞,采用倒置显微镜进行形态学观察;实验组:为用含有诱导剂的低糖DMEM培养基的诱导培养组;对照组:为常规培养组,倒置显微镜HE染色观察记录各代次细胞形态等特征;通过碱性磷酸酶(ALP)染色及标准化钙结节计数,鉴定细倒置显微镜及HE染色观察记录细胞形态等特征。体外分离培养成骨细胞后,随机分组进行不同浓度酒精干预,利用AO/EB染色观察细胞凋亡形态学改变。   结果:培养12天后对两组细胞进行ALP染色,显示实验组细胞质内ALP染色阳性反应明显,对照组染色显色弱,实验组细胞钙化结节数量多且较大,对照组也有钙结节形成,但较小。实验组标准化钙结节计数显著高于对照组,差异具有显著统计学意义(P<0.05),加入0.15 mol/L酒精干预后,成骨细胞发生皱缩,AO/EB染色出现凋亡细胞。   结论:通过密度梯度离心贴壁法所获得的BMSCs在常规培养或诱导培养时均可表现出成骨潜能,诱导培养成骨能力确切,可为骨组织实验研究提供理想的细胞模型,酒精可以引起体外培养成骨细胞凋亡,是酒精性骨损害的发生机制之一。
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