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目的：①比较正常人胚鼻咽上皮（HENE）细胞、二亚硝基哌嗪转化的人胚鼻咽上皮（HENE）细胞系（7429）、鼻咽癌细胞系（HNE1）细胞色素P4502E1（CYP2E1）基因编码区序列，探讨化学物质致鼻咽癌变过程中CYP2E1结构、功能特点。 ②建立可调控的CYP2E1基因体外异源表达细胞系，为进一步研究人CYP2E1相关的药物、致癌物代谢以及筛选抗毒、抗癌物质提供体外模型。 方法：①采用RT-PCR方法分别从HENE、7429、HNE1细胞系中克隆CYP2E1 cDNA片段，测序分析其结构特征。 ②将7429 CYP2E1 cDNA全长重组至RevTet-On系统中的pRevTRE质粒；先用脂质体介导法将RevTet-On系统中的pRevTet-On导入NIH3T3细胞，G418筛选后，挑取抗性克隆扩大培养，RT-PCR鉴定挑选出rtTA高表达的Tet／3T3细胞；再将重组的pRevTRE-2E1导入该细胞，潮霉素（Hygromycin B）筛选后随机挑取若干抗性克隆扩大培养，运用RT-PCR、Western blot选择对Dox诱导敏感的细胞克隆。 ③用不同浓度Dox诱导Tet／3T3-6细胞24hr后，各组细胞部分用于CYP2E1 mRNA和蛋白表达的检测；部分加CYP2E1特异底物氯唑沙腙（CZ）处理9小时，HPLC法检测其代谢产物6-羟基氯唑沙腙（6-OH-CZ）生成量。 ④对照组不加Dox，而实验组加Dox（1μg／ml）诱导后，再加CZ分别处理3、5、7、9、12小时，HPLC法检测其代谢产物6-羟基氯唑沙腙（6-OH-CZ）生成量。 结果：①与HENE-2E1比较，7429-2E1存在846位（A→T）、901位（A→G）两个点突变；HNE1-2E1存在901位（A→G）一个点突变。 ②与人肝脏CYP2E1 CDs序列（GenBank号为J02843）比较，中南大学湘雅医学院硕士学位论文 中文摘要发现HNE卜ZEI序列与其完全匹配；HENE上 序列存在gm位 （G—A）点突变；7429上 序列存在846位（A—T）点突变。但上述突变对应部位氨基酸序列并无改变。 ③获得3个D比诱导表达CYPZEI的Tet／3T3毛 细胞克隆，其中 Tet／3T3－2EI－6对 DOX较敏感。 ④Te们 T3上 6细胞模型CYPZEI基因的表达和代谢功能呈明显的DoX浓度依赖性。 ⑤在… g／ml Dox诱导后，该细胞模型对氯隆沙8宗的代谢能力有明显的时间依赖性。 结论：①成功从鼻咽细胞克隆出 CYPZEI CDNA全长，首次证实鼻咽组织是 CYPZEI肝外表达的器官之一。 ②CYPZEI基因编码区一方面具有高度保守性，另一方面可能存在单核着酸多态性。 ③首次建立了体外可调控CYPZEI基因的异源性表达，且其代谢能力与表达呈正相关的细胞模型。