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目的:高原现场下研究红景天苷对H9C2心肌细胞形态和增殖活性的影响,及对LDH、MDA、SOD表达活性的影响,及对线粒体膜电位和caspase表达的影响,从而揭示低压低氧环境下红景天苷的抗缺氧作用,并为多种缺血缺氧疾病的治疗提供新的思路和方法。方法:1.H9C2低压低氧培养,按常规贴壁细胞培养方法接种于含15%胎牛血清的H-DMEM中,5%CO2,37℃培养箱中培养,2-3d换液传代一次。2.倒置相差显微镜观察H9C2心肌细胞的细胞心态。3.CCK-8检测H9C2心肌细胞的细胞活力。4.分别用LDH、MDA、SOD试剂盒检测H9C2心肌细胞内LDH的漏出量、MDA的堆积量、SOD的活性改变。5.JC-1检测H9C2细胞线粒体膜电位的变化情况。6.caspase-3多克隆抗体和即用型SABC-AP(兔Ig G)试剂盒检测H9C2细胞内caspase-3蛋白表达的变化。结果:1.未加药时细胞增殖情况为,第一天内增殖曲线趋势呈现下降,7d之内的增殖曲线趋势为平缓上升,而7-11d时曲线急剧上升,11d后曲线则逐渐变得平直且趋势呈下降,细胞存活率为95.20%。2.与未加药时相比,红景天苷作用于H9C2心肌细胞后,细胞活力增强,且随红景天苷剂量的增加而增强,最强活力为100μg/ml红景天苷时,作用时间的延长也会增强细胞活力。3.以100μg/ml浓度的红景天苷作用于H9C2心肌细胞,随着作用时间的延长,实验组培养基中的LDH表达水平低于对照组,且以3d和5d有明显的统计学差异。4.以100μg/ml红景天苷作用于H9C2细胞,与对照组相比,随着时间的变化,细胞内MDA表达水平下降,而SOD的活性则呈增强趋势。5.氧自由基增加导致线粒体膜受损害,从而使线粒体膜电位下降,而在加药红景天苷(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)后的1d,3d,7d,分别用JC-1染色、荧光显微镜检测观察线粒体膜电位的变化:加药组和对照组在初期都有红色荧光,线粒体膜电位反应迅速,随着细胞培养时间的延长,加药组和对照组的红色荧光对比明显,且减弱,绿色荧光增强.6.caspase-3多克隆抗体和即用型SABC-AP(兔Ig G)试剂盒检测H9C2心肌细胞内caspase-3的活性,发现7d内红色荧光逐渐减少,且亮度减弱,说明caspase-3蛋白表达水平下降.结论:红景天苷通过升高SOD活性和降低LDH、MDA含量以维持细胞内氧化和抗氧化水平的平衡及细胞膜的完整性,显示对H9C2心肌细胞具有明显的抗缺氧作用和保护作用,且主要体现在高剂量(>10μg/ml)时。通过线粒体膜电位的升高和caspase-3蛋白表达的减少,显示红景天苷具有稳定线粒体功能和抗细胞凋亡的能力。