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既往研究表明，非成熟的胸腺细胞若遭遇抗原、抗CD3单克隆抗体、植物血凝素（PHA）或糖皮质激素刺激时，通常会发生凋亡。近年来发现这种现象并不限于非成熟的免疫细胞，同样能在成熟的外周血淋巴细胞中出现。淋巴细胞经刺激活化后再发生凋亡的现象被称为激活诱导细胞死亡（activation-induced cell death，AICD）。研究发现20％～30％的反应性T细胞在同种抗原的再刺激下发生凋亡，这种淋巴细胞经活化增殖到凋亡的现象被称作本体自杀性或本体自溶性调节（propriocidal or propriolyticregulation）。这种调节可能是T细胞生理性反应机制的一部分，同时也可能形成一种外周淋巴细胞免疫耐受机制。 细胞免疫对于机体抵抗病毒感染起非常重要的作用，然而病原体如病毒在巨大的生存压力下也演化出若干能对抗机体免疫的能力。一方面，感染细胞的凋亡是机体细胞免疫清除病毒感染的一种手段，另一方面，病毒可利用调节免疫细胞凋亡等手段力求在体内生存、复制及播散。目前已发现一些病毒能诱导外周血淋巴细胞的凋亡，如人免疫缺陷病毒（HIV）、Ⅰ型单纯疟疾病毒（HSV-1）、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）等。激活诱导细胞死亡（AICD）现象一方面限制过强的免疫反应对机体造成的损害，另一方面，AICD引起的外周淋巴细胞免疫耐受可能是病毒得以在体内长期存在的重要原因。 研究病毒感染时淋巴细胞发生的AICD现象及淋巴细胞的状况对了解病毒感染慢性化和重型化机理是非常必要的。乙型肝炎病毒（HBV）常致慢性化和重型化感染，其机制迄今尚未充分阐明，弄清以下问题对揭示乙型肝炎发病机理具有重要意义：HBV能否诱导外周血淋巴细胞发生凋亡；AICD在HBV感染中的存在情况及意义；HBV感染期间机体淋巴细胞及其亚群状况；ThllThZ细胞因子在HBV感染中的变化与AICD的关系。为此，本课题就上述问题进行了系列的研究。主要研究结果及结论如下。 1．乙型肝炎患者外周血单个核细胞凋亡的检测 通过设置不同诱导剂在不同浓度、不同时相诱导PBMC凋亡，以探索慢性乙型肝炎PBMC发生AICD恰当的诱导剂类型、浓度和时间，实验结果显示 PHA是一种良好的 AICD诱导剂，PHAo u g／10‘cells处理组接种培养 72 h对 PBMC凋亡的诱导是恰当的。 分离14例慢性乙型肝炎，6例漫性重型乙型肝炎病人与10例健康献血员外周血单个核细胞0BMC人 在PHAI的刺激下培养7211后收集细胞，采用PI染色法经流式细胞仪检测凋亡。以研究AICD现象在乙型肝炎慢性化和重型化机制中的意义。结果发现，慢性乙型肝炎组PBMC凋亡率 （30．57土13．43％）高于正常对照组PBMC凋亡率（11．45土5．27％）（WO．01），高于慢性重型乙型肝炎组 PBMC凋亡率（13．59土 6．44％）（peo．01）；乙型肝炎HBeAg（＋）组PBMC凋亡率高于正常对照组PBMC凋亡率门．50土12．25％VSll．45土5．27％，peo．of)。实验显示不同类型的乙型肝炎PBMC存在不同程度的AICD。 2．朋V阳性血清诱导人外周血单个核细胞凋亡的研究 利用 10名健康献血员外周血分离 PBMC，分为加 HBV阳性血清组和加健康人血清对照组，经培养72 h后，采用PI染色法在流式细胞仪上检测细胞凋亡；利用8例慢性乙型肝炎、5例慢性重型乙型肝炎新鲜分离PBMC、5例健康献血员加 HBV阳性血清培养 72 h后的 PBMC涂片，采用SP免疫细胞化学染色法检测PBMC HBSAg、HBCAg的表达。研究HBV对PBMC凋亡的作用。结果发现，加 HBV阳性血清组培养细胞凋亡率高于加健康人血清组培养细胞凋亡率u9．56土7．03％VS27．57土7．78％，P＜O刀2人 免疫细胞化学染色显示，慢性／慢性重型乙型肝炎患者＊＊＊C与加 HBV阳性血清培养后的健康人PBMC皆有HBSAg、HBCAg的阳性表达。结果提示，HBV感染可能具有诱导PBMC凋亡的能力，这可能是形成HBVt＠性感染兔疫耐受的一个重要机制。HBV感染PBMC是否强化诱导AICD， XI 、O尚需进一步研究加以证明。 3．乙型肝炎患者外周血单个核细胞Fas表达的检测 分离 16例慢性乙型肝炎患者、14例慢性重型乙型肝炎患者和 12例健康献血员PBMC，利用间接兔疫荧光染色法，通过流式细胞仪检测PBMCFas的表达以探讨活化诱导细胞死亡（AICD）在乙型肝炎中的发生机制及意义。结果发现，慢性乙型肝炎组 PBMC Fas表达率u3．31土14．53们高于正常刑照组 PBMC Fas表达率（39．32土 11．28％）（P＜0．05）和慢性重型乙型肝炎组 PBMC Fas表达率（37．93土15．89％）（P＜0．of）。结合第一部分实验，慢性乙型肝炎组PBMC凋亡率＊0．57士13．43肋高于正常对照组 PBMC凋亡率（11．45土5．27％）(P（．of）和慢性重型乙型肝炎组PBMC凋亡率(1