基于环糊精适配体的药物分子纳米孔传感研究

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近年来,食物链中的药物残留问题已成为危害人类健康的一大元凶。因此,建立高效、快速的方法检测药物残留已经成为分析化学研究的热点之一。如何提高检测方法的准确性和灵敏度是这一研究的重中之重。基于此,本文利用α溶血素突变蛋白(M113R)7和6-氨基-6-脱氧-β环糊精(am7-βCD)适配体构建了一种生物传感器((M113R)7-am7βCD),建立了药物在单分子水平上的检测新方法,并成功应用于抗结核药物异烟肼(Isoniazid,INH)以及抗生素类药物氨苄青霉素钠(Ampicillin,Amp)的测定。本研究为检测其他药物分子残留提供了参考方法,同时也在一定程度上扩展了纳米孔单分子技术的应用范围。主要的研究内容如下:1.文献综述简述了纳米孔单分子检测技术的发展历史、基本原理等。重点介绍了基于适配体尤其是环糊精适配体的纳米孔单分子检测技术在DNA测序、金属离子和有机小分子检测以及主客体动力学研究方面的应用。2.基于环糊精适配体的异烟肼纳米孔传感研究在纳米孔单分子水平上构建了(M113R)7-am7βCD生物传感器,通过对蛋白质、环糊精适配体的选择以及对实验电压、pH等一系列条件的优化,实现了对药物分子异烟肼的检测。研究表明,高电压和中性条件有利于检测灵敏度;电压增大,事件频率(f)不断增大,结合速率常数(kon)和形成常数(Kf)都在增大。相比于pH6.0,pH10.0的缓冲环境,pH8.0条件下,am7βCD背景信号更干净,与异烟肼结合的特征信号更明显。基于该传感器检测INH的线性范围为0.5-30μM,检出限为2 nM,同时通过检测常见的药物赋形剂以及在溶液中可能共存的金属离子(高于异烟肼浓度40倍)证明该方法具有良好的选择性。3.基于环糊精适配体的氨苄青霉素钠盐纳米孔传感研究基于所构建的(M113R)7-am7βCD生物传感器,实现了抗生素分子氨苄青霉素钠盐的检测。通过计算环糊精适配体与氨苄青霉素钠的动力学常数,探究两者之间的相互作用。对其他抗生素如庆大霉素、阿霉素等的检测,证明了该体系对氨苄青霉素钠具有特异性识别。该方法检测氨苄青霉素钠的线性范围为0.01-40μM,检出限为8 nM。
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