柿皮类胡萝卜素的提取分离及其抗氧化应激作用

来源 :天津商业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zkl_2009
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天津蓟县磨盘柿子品质佳。柿皮是柿子重要的组成部分,富含多种生物活性成分,如多酚、黄酮、膳食纤维以及类胡萝卜素等,特别是柿皮中类胡萝卜素含量较其它部分高。类胡萝卜素不仅是重要的天然色素,同时也具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤等生物活性。柿皮往往是一种柿子深加工的一种的副产物,该资源的深度开发,特别是其所含的柿皮类胡萝卜素的提取以及其功能性的评价具有十分重要理论和应用价值。首先探讨有机溶剂回流法提取柿皮类胡萝卜素工艺,利用单因素以及响应面法Box-Behnken优化提取工艺条件,并且利用高效液相色谱法定性与定量分析所提取的柿皮类胡萝卜素中的主要成分。结果表明:以丙酮∶石油醚(1∶2)为提取溶剂、料液比1:35.25 g/mL、温度43.85℃、时间123.9 min,柿皮中类胡萝卜素的提取量为45.63 mg/100 g,与预测值42.55 mg/100 g的相对误差较小;回归方程的预测值和实验值差异不显著,回归模型拟合情况良好,符合要求;HPLC采用C30色谱柱,按照梯度洗脱的程序,3个主要柿皮类胡萝卜素成分的出峰时间分别为玉米黄质16.50min、β-胡萝卜素26.74 min、番茄红素36.44 min,含量分别为3.33μg/g、19.58μg/g、61.52μg/g。其次采用多种体外抗氧化检测模型分析柿皮类胡萝卜素的抗氧化活性,通过检测PC、SPC的总抗氧化能力、ABTS自由基清除能力、DPPH自由基清能力、脂质过氧化物,还原力以及与VC的协同抗氧化作用,然后再与传统的抗氧化剂VC、VE进行了比较,综合评定了柿皮类胡萝卜素的抗氧化作用能力。结果表明柿皮类胡萝卜素具有很好的抗氧化性能,抗氧化性能随着浓度的增大逐渐的增大。且与几种抗氧化剂的抗氧化能力大小的比较为VC>VPC>PC>VE>VSPC>SPC。最后利用PC12细胞建立细胞层面上的抗氧化模型,通过分子荧光探针和化学发光法进一步分析柿皮类胡萝卜素对于H2O2诱导的细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,H2O2可诱导PC12细胞的氧化损伤(200μmol/L H2O2处理6 h,细胞活力为54.66%),而添加0.2、0.6和1.0 mg/mL的类胡萝卜素均可抑制H2O2诱导的细胞的氧化损伤(细胞活力值为67.78%、76.60%、88.80%);除此之外,H2O2可以导致PC12细胞活性氧、MDA增多,而加入0.2、0.6和1.0 mg/mL的类胡萝卜素可以降低细胞内活性氧的水平,清除细胞内的丙二醛,达到保护细胞的作用。
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