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我们从下述几方面开展了核酸诊断技术标准化的研究：第一,对炭疽芽孢杆菌、鼠疫耶尔森氏菌、布鲁氏菌、土拉费朗西斯氏菌和类鼻疽伯克霍尔德氏菌各选取2个不同的基因,设计引物,建立了这些细菌的PCR检测方法;第二,因尿嘧啶糖基化酶（UDG）可特异降解DNA双链中的尿嘧啶核苷,PCR体系中以dUTP代替dTTP,并在PCR扩增前用UDG消化15min,就可以特异防止PCR产物的污染.我们对炭疽芽孢杆菌、鼠疫耶尔森氏菌、土拉弗朗西斯氏菌和布鲁氏菌扩增结果表明,0.1U的UDG可完全消化10<3>～10<8>个产物分子的污染;第三,建立了微孔板杂交技术代替电泳方法检测扩增产物,将PCR产物克隆作为捕获探针包被聚乙烯微孔板,PCR引物5’末端生物素标记,扩增后作为待检测探针杂交,通过比较影响微孔板杂交的包被、杂交和显色等因素,建立了PCR-EIA技术.通过比较包被缓冲液发现镁离子及其离子强度是影响DNA包被的重要因素,包被的DNA以线型质粒最佳,每孔包被300ng左右的DNA杂交效果最好;杂交液中加和不加甲酰胺对杂交影响不大;用链霉亲和素化的辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶酶联显色均能达到检测杂交体的目的,但前者显色较快,更为实用.我们确定了PCR-EIA技术的最佳的包被、杂交和显色的条件,PCR-EIA技术比常规PCR-电泳检测敏感性高10倍;第四,建立了每个菌的双重PCR检测技术;第五,我们研制成功室温稳定的PCR试剂,将所有PCR成分（加入一种酶保护剂）配制并分装于微量离心管中,并干燥,试剂室温放置8个月,37℃破坏2周对检测结果无任何影响;第六,比较了不同标本处理方法,确定了各种临床标本和动物组织的较为理想的处理方法.通过上述不同方面的研究,我们确定了从引物设计、试剂配制、标本处理、UDG防污染和产物微孔板杂交-酶联显色检测等方面的优化条件,建立起敏感性高、特异性强、操作简便和检测客观的UDPE（UDG-Duplex-PCR-EIA）核酸检测技术,为临床实验室的常规应用和反生物战病原微生物的核酸诊断奠定了基础.