论文部分内容阅读
目的：采用免疫共沉淀偶联质谱技术分离和鉴定旋毛形线虫肌幼虫代谢分泌抗原,为筛选和鉴定旋毛形线虫病的有效诊断抗原及疫苗候选分子奠定基础。方法：1.旋毛形线虫感染新西兰兔,采用硫酸铵沉淀法分离血清IgG；从感染肌肉中分离纯化肌幼虫并培养收集代谢分泌抗原。2.免疫共沉淀和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离代谢分泌抗原。3.质谱技术鉴定各蛋白质条带,利用肽片段质谱图分析鉴定血清学抗原。结果：1.间接酶联免疫吸附试验检测旋毛形线虫感染新西兰兔的血清抗体达1：6400以上；采用硫酸铵沉淀法使兔血清IgG得到有效的分离。2.制备的代谢分泌抗原经电泳分离鉴定在约175kDa、83kDa、60kDa、32kDa处存在4条较清晰的蛋白质条带,提示旋毛形线虫肌幼虫培养24h后获得了代谢分泌抗原。3.免疫共沉淀的旋毛形线虫肌幼虫代谢分泌抗原经电泳分离获得5条较清晰的蛋白质条带,免疫印迹分析发现在40kDa至60kDa之间存在旋毛形线虫感染血清识别、正常兔血清不识别的2条较强的蛋白质条带。4.切取约40kDa和约55kDa处的蛋白质条带进行酶解和串联质谱分析,获得4种蛋白质分子,分别为丝氨酸蛋白酶、肌幼虫特异性丝氨酸蛋白酶、43kDa分泌糖蛋白、53kDa代谢分泌抗原。结论：1.旋毛形线虫肌幼虫代谢分泌抗原经分离和鉴定获得4种蛋白质分子,分别为丝氨酸蛋白酶、肌幼虫特异性丝氨酸蛋白酶、43kDa分泌糖蛋白、53kDa代谢分泌抗原。2.免疫共沉淀偶联质谱技术可有效分离和鉴定旋毛形线虫肌幼虫代谢分泌抗原。